In un articolo pubblicato su Piccolo , i ricercatori hanno applicato con successo un nuovo metodo qualitativo e quantitativo per il rilevamento di una sequenza di DNA caratteristica del cinetoplasto di Leishmania infantum, un parassita frequente in veterinaria che colpisce anche l'uomo.

Superare la classica tecnica PCR

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è il metodo standard odierno per identificare la presenza di una specifica sequenza di DNA in un campione. La PCR utilizza enzimi e due primer, filamenti di brevi sequenze di acidi nucleici che servono come punto di partenza per la copia del DNA. Quando il rilevamento è positivo, questa tecnica produce milioni di copie della sequenza del problema per facilitarne l'individuazione. Questa amplificazione del DNA comporta sbalzi termici precisi (termociclo) e apparecchiature sofisticate e costose, che sono superati da un approccio alternativo chiamato amplificazione isotermica, eseguita a temperatura costante.

Gli autori dell'articolo presentano un nuovo progetto di amplificazione isotermica utilizzando primer etichettati sia con nanoparticelle d'oro che con microsfere magnetiche. Il prodotto amplificato porta entrambe le etichette che consentono una rapida purificazione e quantificazione. Le proprietà magnetiche del primo primer facilitano la purificazione/preconcentrazione del DNA amplificato attraverso metodi di separazione magnetica. D'altra parte, le nanoparticelle d'oro sono facilmente quantificabili con semplici metodi di rilevazione elettrocatalitica. Così, l'uso di primer marcati con nanoparticelle d'oro e microsfere magnetiche trasforma l'amplificazione isotermica in un metodo diagnostico qualitativo e quantitativo più rapido e semplice.

Nanoparticelle per il rilevamento della Leishmania e altri test point-of-care

Questo approccio è stato applicato con successo per il rilevamento di una sequenza di DNA caratteristica del cinetoplasto di Leishmania infantum, un parassita responsabile di una malattia nei cani domestici, canidi selvatici e umani. Il metodo elettrochimico ha mostrato una buona riproducibilità e sensibilità. Per di più, il DNA amplificato di cani senza Leishmania era perfettamente discriminato, dimostrando la specificità sia della procedura di amplificazione che della rivelazione elettrochimica. Infatti, le prestazioni dell'approccio proposto sono migliori di quelle ottenute con altri test point-of-care per il rilevamento della Leishmania, offrendo anche uno strumento quantitativo per la determinazione dei parassiti. Questo metodo rappresenta una metodologia universale che potrebbe essere applicata per qualsiasi progetto di amplificazione isotermica del DNA.