La clonazione TA è un metodo semplice e conveniente di subclonazione dei prodotti della reazione a catena della polimerasi (PCR). "TA" è l'abbreviazione di "timina" e "adenina". Questa tecnica di clonazione utilizza la capacità della timina di ibridarsi con l'adenina in presenza di ligasi. Gli enzimi di restrizione non vengono utilizzati, a differenza del tradizionale metodo di subcloning. Invece, i prodotti della PCR sono amplificati usando gli enzimi Taq polimerasi.

Method

Il metodo di clonazione TA utilizza l'attività di transferasi terminale di una certa sporgenza di acido desossiribonucleico a ciascuna estremità del prodotto della PCR. p> Un vettore di clonazione linearizzato con sporgenze singole, tre prime-T (3'-T) chiamato un vettore T viene utilizzato per clonare questo prodotto PCR in un vettore plasmidico. Il prodotto PCR è mescolato con questo vettore in alta proporzione.

La ligasi del DNA (ligasi T4) viene aggiunta alla miscela, che consente ai due prodotti di ibridizzarsi e unirsi.

Vantaggi e svantaggi

La clonazione TA è un metodo conveniente per subclonare i prodotti PCR nel vettore linearizzato ed è molto più semplice e veloce rispetto ai metodi di subcloning tradizionali. Poiché questo metodo non utilizza enzimi di restrizione, è possibile clonare prodotti senza siti di enzimi di restrizione.

Uno svantaggio è che i kit di clonazione TA sono molto costosi e, di conseguenza, il loro uso è limitato. Inoltre, non esiste una clonazione direzionale; quindi la probabilità di clonazione in direzione opposta è maggiore.

TA Cloning Kits

Diversi produttori vendono kit di clonazione TA. Alcuni sono Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft.