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    Piccoli codici a barre luminosi identificano le molecole con il loro scintillio

    Questi minuscoli punti di luce potrebbero sembrare stelle che brillano nel cielo. Ma in realtà sono diverse molecole di DNA che si illumina, lampeggiano e si spengono mentre si legano e si staccano al microscopio. Credito:Shalin Shah, Duke University

    Una tecnica di imaging sviluppata alla Duke University potrebbe consentire di scrutare all'interno delle cellule e osservare dozzine di molecole diverse in azione contemporaneamente, etichettandole con brevi filamenti di DNA luminoso che lampeggiano con il loro ritmo unico.

    "L'idea è che ogni cosa ha il suo battito cardiaco, " ha detto il primo autore Shalin Shah, un dottorato di ricerca studente in ingegneria elettrica e informatica e informatica alla Duke. "Chiamiamo questi segnali temporali 'codici a barre temporali'".

    Quando è attaccato a celle o altri oggetti e osservato per un tempo sufficiente, questi codici a barre potrebbero essere utilizzati per rilevare e distinguere un numero qualsiasi di cose su scala molecolare, comprese particolari proteine ​​nascoste tra le decine di migliaia di cui il corpo umano ha bisogno per funzionare e crescere.

    La tecnica funziona utilizzando le interazioni fugaci tra due filamenti complementari di DNA mentre si scontrano in soluzione. Un filo è attaccato a una molecola che i ricercatori vogliono studiare. L'altro è fluttuante e trasporta una tintura fluorescente che si illumina quando i due fili si accoppiano e poi si oscura una volta che si separano. Se visto al microscopio nel tempo, la rilegatura e lo slegamento creano uno schema lampeggiante distinto che, decodificato, funge da impronta digitale.

    Le tecniche tradizionali distinguono le molecole utilizzando coloranti di colore diverso, o utilizzando un colore ma diverse sequenze di DNA e imaging in fasi, lavandoli via da un bersaglio prima di passare al successivo.

    Shah e i suoi colleghi dicono che possono fare di meglio.

    Lavorando con il professore di informatica della Duke John Reif e il ricercatore post-dottorato Abhishek Dubey dell'Oak Ridge National Laboratory, l'approccio del team aumenta il numero di segnali diversi che è possibile distinguere con un singolo colore di tintura. Ma piuttosto che fare affidamento su più sequenze di DNA come i precedenti metodi monocolore, mantengono la stessa sequenza del filamento fluttuante e modificano invece cose come la lunghezza o il numero di sequenze ripetute sul filamento attaccato alla molecola di interesse. Ciò consente loro di produrre lampi con frequenze diverse, durate e luminosità.

    In un articolo pubblicato online il 5 aprile sulla rivista Biologia sintetica ACS , simulazioni al computer suggeriscono che è teoricamente possibile distinguere fino a 56 molecole diverse contemporaneamente, ciascuno lampeggiante acceso e spento nello stesso colore. E se vengono utilizzati più colori di tintura, i palloncini sono migliaia. I ricercatori affermano che la loro tecnica è anche in grado di farlo a una frazione del costo di altri metodi, e senza sbiadire sotto il bagliore del microscopio nel tempo.

    In un articolo pubblicato il 21 marzo sulla rivista Nano lettere , il team ha anche testato il loro approccio in laboratorio. Shah e Reif hanno progettato sette diversi dispositivi per il DNA, attaccati a una superficie di vetro, e li ha ripresi utilizzando la microscopia a fluorescenza. Con meno di un'ora di dati sono stati in grado di utilizzare il comportamento di lampeggio distinto di ciascun dispositivo per distinguerli.

    "Il nostro obiettivo è sviluppare un sistema economico e semplice, ma potente metodo, " Shah ha detto. "I segnali di intensità temporale emessi sono distinti e possono agire come un'impronta digitale".


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