La soglia di concentrazione del substrato per l'inizio di una reazione enzimatica è nota come costante di Michaelis, o Km. Questa è la concentrazione del substrato alla quale la velocità di reazione è la metà della Vmax. A questo punto, metà dei siti attivi dell'enzima sono occupati da molecole di substrato e la reazione procede a metà della velocità massima possibile. Aumentando la concentrazione del substrato al di sopra del Km aumenterà la velocità di reazione, ma non raggiungerà il Vmax finché tutti i siti attivi dell'enzima non saranno saturati.
Il Km è un parametro importante per comprendere la cinetica delle reazioni enzimatiche. Può essere utilizzato per determinare l'affinità di un enzima per il suo substrato e può anche essere utilizzato per calcolare la velocità di una reazione enzimatica a una determinata concentrazione di substrato.
