Gli scienziati usano diluizioni seriali (una serie di diluizioni 1:10) per calcolare la densità di popolazione delle colture batteriche. Quando una goccia di coltura contenente un piccolo numero di batteri viene placcata e incubata, ogni cellula teoricamente sarà abbastanza lontana dalle altre cellule da formare la propria colonia. (In realtà, alcune colonie possono essere discendenti di due cellule vicine, ma questo è raro nelle culture diluite, e quindi il numero di colonie è una stima molto buona del numero di cellule originariamente trasferite alla piastra.) Poiché la densità di popolazione è sconosciuto, deve essere utilizzata una varietà di diluizioni per finire con una piastra con un numero appropriato di colonie.

Diluizioni seriali

Etichettare le sei provette (ciascuna contenente 9 ml di crescita media) da 1 a 6. Etichettare le sei piastre di agar come da 1 a 6. Utilizzare un pipettatore e punte di pipetta sterili da 1 millilitro (ml) per trasferire 1 ml di coltura batterica nel tubo 1.

Miscelare bene e trasferire 1 ml dalla provetta 1 nella provetta 2 usando un pipettatore e punte sterili da 1 mL.

Ripetere il passaggio 2 per le provette rimanenti, ogni volta trasferendo 1 mL dalla provetta usata più di recente alla provetta successiva.

Utilizzare un pipettatore e punte sterili da 0,1 ml per trasferire 0,1 ml dalla provetta 1 a una piastra di agar. Fiamma una bacchetta di vetro a forma di L e usala per distribuire la goccia uniformemente attorno alla piastra. Incubare la piastra per 48 ore a una temperatura appropriata per i batteri utilizzati. Diversi tipi di batteri hanno diverse temperature di crescita ottimali. Se non riesci a trovare la temperatura di crescita ottimale usando il materiale di riferimento, prova ad incubare le piastre a 25 e 37 gradi.

Ripeti il ​​passaggio 4, ogni volta che trasferisci il liquido da una provetta diversa sulla relativa piastra.
< h2> Calcoli di popolazione

Osserva le sei piastre e scegli quella con 30 a 200 colonie isolate.

Moltiplichi il numero di colonie sulla piastra per 10 per calcolare il numero di cellule per ml di coltura dal tubo di diluizione utilizzato.

Moltiplicare il numero dal passaggio 2 per 10 ^ (numero di piastra) per calcolare il numero di cellule per ml della coltura originale. Il valore di 10 ^ (numero di placca) è il fattore di diluizione della coltura utilizzata per l'innocuità di quella placca.

Suggerimento

Includere tutti i nutrienti necessari nelle piastre di agar. I batteri auxotrofi richiedono determinati amminoacidi oltre agli ingredienti di base dei media. Diversi auxotrofi hanno diversi requisiti nutrizionali. Consulta il materiale di riferimento per scoprire quali aminoacidi, se ce ne sono, i tuoi batteri hanno bisogno.

Attendi un secondo tra l'asta di vetro fiammante e usandola, in modo da non bruciare i batteri.

Attenzione

Indossa sempre guanti da laboratorio quando maneggi i batteri.