Gli scienziati usano la citometria a flusso per differenziare tra diversi tipi di cellule o organismi microscopici. È uno strumento utilizzato in molte applicazioni come la diagnostica medica o la patologia forense. Sebbene questa tecnica sperimentale sia abbastanza facile da eseguire, l'analisi dei dati complessi prodotti dal citometro a flusso è più difficile a causa dei molteplici fattori sperimentali e /o dei parametri citometrici. In quanto tale, è normale che i dati citometrici vengano visualizzati e analizzati utilizzando sofisticati programmi professionali come CELLQuest o FlowJo. La familiarità con tecniche di citometria a flusso, macchinari e software è necessaria per comprendere i risultati prodotti da questi esperimenti.
Capire i dati di citometria a flusso
Chiarire lo scopo dell'esperimento chiedendo, "Cosa era la domanda o l'ipotesi indagate? " Questo sarà necessario per adattare i risultati grezzi al formato e alle impostazioni appropriate per ulteriori analisi utilizzando il software di citometria statistica. Apporta le modifiche necessarie per visualizzare i dati con le impostazioni pertinenti (ad esempio celle positive, porte negative, intensità della fluorescenza, popolazioni di celle ecc.).
Trova porte. Le celle possono essere raggruppate o semplicemente osservate raggruppate insieme su un grafico di densità o di contorno. I gruppi spesso si separano a seconda della loro identità. Se un gruppo macchia molto intensamente per un particolare marcatore o anticorpo, si conclude che i membri di quel gruppo hanno tutti l'identità del tipo specifico di cellula, che esprime quel marcatore. È comune trovare cellule positive per più di uno di questi marcatori e queste cellule sono di solito un intermedio e denotate come "doppio-positivo".
Guarda gli scattergraph. Il modo in cui i gruppi di celle si espandono in un grafico a dispersione è un'indicazione della dimensione delle celle. Le celle con dispersioni molto grandi o alte sono in genere celle grandi; tuttavia, possono essere grandi semplicemente perché contengono un'alta percentuale di citoplasma, o possono essere alti perché hanno un nucleo molto grande. A seconda della biologia che si sta studiando, questo ovviamente cambierà molto tra gli esperimenti.
Guarda i numeri. Regolare i grafici per visualizzare diversi parametri su un asse (in genere l'asse X) mantenendo i conteggi sull'asse Y. Questo indica la proporzione della popolazione del campione che è positiva per quel particolare parametro, in quanto normalmente si osserverà un picco in un campione con colorazione positiva, che sarà assente dal campione di controllo negativo.
Guarda multiple- istogrammi dei parametri. Regolando l'asse X e l'asse Y ognuno di essi rappresenta un parametro diverso che è stato studiato durante l'esperimento, è possibile ottenere una comprensione più profonda delle proprietà del campione. Ad esempio, impostando l'asse X su fluorescenza rossa e l'asse Y su fluorescenza verde, è possibile calcolare porte quadrate per il campione per mostrare quattro regioni di un quadrante in cui le cellule sono presenti e colorate per il rosso o il verde fluorescenza, entrambi i colori o nessuno. Ciò consente di dividere un campione eterogeneo nelle sue parti componenti e in ogni entità sovrapposta per essere visualizzato e quantificato.
