La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) è una tecnica di laboratorio utilizzata per separare e identificare i composti. È un tipo di cromatografia su colonna che si basa su diverse polarità di composti in una soluzione per separarli. L'HPLC differisce dalla cromatografia su colonna standard perché utilizza la pressione per forzare la soluzione attraverso la colonna più rapidamente, e quindi produce risultati più rapidi, e talvolta più accurati. L'obiettivo è separare i composti nella colonna e farli uscire separatamente.

Coelution

A causa della velocità dell'HPLC e della dipendenza da diverse polarità di composti, due composti con struttura e polarità simili può uscire dall'apparecchio cromatografico allo stesso tempo o quasi allo stesso tempo. Questo è noto come coelution. La coeluizione consente di determinare esattamente quale porzione della miscela ha eluito a quale punto è difficile.

Composti adsorbiti

L'HPLC utilizza in genere una colonna di vetro riempita con perline in materiali diversi. Le miscele che vengono forzate attraverso la colonna hanno sostanze chimiche che si legano con diverse forze alle perle. La forza del legame, che dipende dalla somiglianza nella polarità, determina per quanto tempo la sostanza chimica si legherà al tallone prima di essere rilasciata. Alcuni composti si legano così fortemente da non essere praticamente mai rilasciati dalle sfere nella colonna e non vengono mai misurati nella soluzione in uscita dalla colonna.

Costo

Le tecniche tipiche di separazione di laboratorio comportano lo sviluppo di un test, o metodo di separazione, e quindi implementare tale analisi per separare i singoli composti da una soluzione. Tuttavia, di solito questo si traduce in più soluzioni che devono anche essere sottoposte a procedure, portando ad un aumento esponenziale della complessità. Sebbene HPLC possa spesso semplificare e velocizzare questo processo, il costo di sviluppo di un apparato HPLC può diventare enorme. Lo sviluppo di un apparato HPLC, sebbene molto più efficiente, è molto più costoso rispetto allo sviluppo di altri test per la separazione dei composti. Ciò non rende finanziariamente fattibile per molti piccoli laboratori privati.

Complessità

L'HPLC non viene utilizzato solo per separare composti semplici, ma viene anche utilizzato per isolare proteine ​​specifiche da una miscela cellulare. In questo caso le sfere nella colonna sono solitamente rivestite con un anticorpo specifico per la proteina che è necessario raccogliere. Le proteine ​​legano gli anticorpi e la soluzione rimanente viene fatta passare attraverso la colonna, quindi le proteine ​​vengono rilasciate usando un'altra soluzione e raccolte. Ciò richiede un tecnico altamente qualificato per monitorare la colonna in ogni momento e assicurarsi che il processo funzioni esattamente come pianificato.