La cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) è una tecnica di laboratorio utilizzata per separare e identificare i composti. È un tipo di cromatografia su colonna che si basa su diverse polarità dei composti in una soluzione per separarli. L'HPLC differisce dalla cromatografia su colonna standard perché utilizza la pressione per forzare la soluzione attraverso la colonna più rapidamente e quindi produce risultati più rapidi e talvolta più accurati. L'obiettivo è separare i composti nella colonna e farli uscire separatamente.
Coelution

A causa della velocità dell'HPLC e della sua dipendenza da diverse polarità dei composti, due composti con struttura e polarità simili possono uscire dal apparecchio per cromatografia allo stesso tempo o quasi allo stesso tempo. La coeluizione rende difficile determinare esattamente quale parte della miscela è stata eluita in quale momento difficile.
Composti adsorbiti

L'HPLC utilizza in genere una colonna di vetro riempita con perline di materiali diversi. Le miscele forzate attraverso la colonna hanno sostanze chimiche che si legano con diversi punti di forza alle perle. La forza del legame, che dipende dalla somiglianza nella polarità, determina per quanto tempo la sostanza chimica si legherà al tallone prima di essere rilasciata. Alcuni composti si legano così fortemente che essenzialmente non vengono mai rilasciati dai granuli nella colonna e non vengono mai misurati nella soluzione che esce dalla colonna.
Costo

Le tecniche tipiche di separazione in laboratorio comportano lo sviluppo di un test o metodo di separazione, e quindi implementando quel test per separare i singoli composti da una soluzione. Tuttavia, ciò si traduce generalmente in molteplici soluzioni che devono anche essere sottoposte a procedure, portando a un aumento esponenziale della complessità. Sebbene l'HPLC possa spesso semplificare e accelerare questo processo, i costi di sviluppo di un apparato HPLC possono diventare enormi. Lo sviluppo di un apparato HPLC, sebbene molto più efficiente, è molto più costoso rispetto allo sviluppo di altri test per la separazione dei composti. Ciò non lo rende economicamente valido per molti piccoli laboratori privati.
Complessità

L'HPLC non viene utilizzato solo per separare composti semplici, ma viene anche utilizzato per isolare proteine specifiche da una miscela cellulare. In questo caso, le perle nella colonna sono di solito rivestite con un anticorpo specifico per la proteina che è necessario raccogliere. Le proteine legano gli anticorpi e la soluzione rimanente viene fatta passare attraverso la colonna, quindi le proteine vengono rilasciate usando un'altra soluzione e raccolte. Ciò richiede che un tecnico altamente qualificato controlli la colonna in ogni momento e si assicuri che il processo sia eseguito esattamente come previsto.