1. DNA modello:
* Funzione: La sequenza del DNA che si desidera amplificare. Serve da progetto per l'enzima polimerasi da copiare.
2. Primer:
* Funzione: Sequenze di DNA brevi a singolo filamento (in genere 18-30 nucleotidi) che sono complementari a regioni specifiche sul DNA del modello. Si legano al DNA del modello e forniscono un punto di partenza per la DNA polimerasi.
3. DNA polimerasi:
* Funzione: Un enzima che sintetizza i nuovi fili di DNA usando il DNA e i primer del modello. Aggiunge nucleotidi all'estremità 3 'del primer in una direzione da 5' a 3 '.
4. Deossinucleo -trifosfati (DNTPS):
* Funzione: Building Blocks of DNA. Sono costituiti da quattro tipi:DATP, DCTP, DGTP e DTTP, che rappresentano le quattro basi (adenina, citosina, guanina e timina). La DNA polimerasi li usa per assemblare i nuovi fili di DNA.
5. Soluzione tampone:
* Funzione: Contiene sali e ioni che mantengono l'attività di pH e la resistenza ionica appropriata per l'attività ottimale della DNA polimerasi.
6. Cloruro di magnesio (MGCL2):
* Funzione: Un cofattore per la DNA polimerasi, richiesto per la sua attività catalitica. Aiuta anche a stabilizzare la struttura del DNA.
7. Acqua:
* Funzione: Solvente per la reazione e fornisce un mezzo per i componenti da interagire.
Ecco un breve riassunto del processo PCR:
1. Denaturazione: La miscela di reazione viene riscaldata a 94-98 ° C, che separa il DNA del modello a doppio filamento in singoli fili.
2. Ricottura: La temperatura viene ridotta a 50-65 ° C, consentendo ai primer di legarsi alle loro sequenze complementari sul DNA del modello a singolo filamento.
3. Estensione: La temperatura viene aumentata a 72 ° C, la temperatura ottimale per la DNA polimerasi. La polimerasi estende i primer, aggiungendo DNTP per creare nuovi fili di DNA.
Questi tre passaggi vengono ripetuti per più cicli, con conseguente amplificazione esponenziale della sequenza del DNA target.
