Gli spettrofotometri sono strumenti essenziali per misurare l'assorbanza e la trasmittanza della luce attraverso un campione, fornendo informazioni preziose in campi come chimica, biologia e medicina. La calibrazione accurata è fondamentale per garantire misurazioni affidabili e precise. Ecco una ripartizione del processo:
1. Calibrazione della lunghezza d'onda:
* usando uno standard: Questo è il metodo più comune. Viene utilizzato uno standard noto con un picco di assorbimento specifico a una lunghezza d'onda nota (ad es. Filtro di ossido di olmio, filtro di didymium).
* Procedura:
* Lo standard è posizionato nel percorso del raggio dello spettrofotometro.
* La lunghezza d'onda dello strumento viene regolata fino alla registrazione della massima assorbanza.
* Lo strumento viene quindi calibrato alla lunghezza d'onda nota del picco dello standard.
* Importanza: Garantisce che lo strumento identifica accuratamente le lunghezze d'onda della luce che utilizza per la misurazione.
2. Calibrazione di assorbanza/trasmittanza:
* usando uno spazio vuoto: Un vuoto è una soluzione che contiene tutti i componenti del campione tranne l'analita misurato.
* Procedura:
* Il vuoto è posizionato nel percorso del raggio dello spettrofotometro.
* Lo strumento è impostato per leggere la trasmittanza al 100% o 0 assorbanza (a seconda dello strumento).
* Questo imposta la linea di base per tutte le misurazioni successive.
* Importanza: Questa fase di calibrazione corregge per qualsiasi assorbanza o trasmittanza causata dal solvente o da altri componenti nel campione che non sono l'analita di interesse.
3. Calibrazione specifica dello strumento:
* Standard di calibrazione: Alcuni spettrofotometri richiedono standard di calibrazione specifici (ad esempio soluzioni con concentrazioni note di analiti specifici).
* Procedura:
* Misurare l'assorbanza o la trasmittanza degli standard usando lo spettrofotometro.
* Inserisci queste misurazioni nel software dello strumento.
* Lo strumento creerà quindi una curva di calibrazione, che mette in relazione l'assorbanza o la trasmittanza alla concentrazione.
* Importanza: Consente allo strumento di convertire direttamente le letture di assorbanza o trasmittanza in misurazioni di concentrazione per analiti specifici.
Suggerimenti aggiuntivi:
* Calibrazione regolare: La calibrazione frequente (giornaliera o settimanale) è essenziale per mantenere l'accuratezza.
* Manutenzione corretta: Mantenere lo strumento pulito e privo di polvere, impronte digitali e graffi è vitale per prestazioni ottimali.
* Utilizzo di standard e reagenti di alta qualità: L'accuratezza della calibrazione dipende dalla qualità degli standard e dei reagenti utilizzati.
* Controllo della temperatura: Alcuni spettrofotometri richiedono un ambiente di temperatura stabile per misurazioni accurate.
Nota: Le procedure e la frequenza di calibrazione specifiche possono variare a seconda del modello dello spettrofotometro e dell'uso previsto. Consultare sempre il manuale dello strumento per istruzioni dettagliate.
