L'isolamento dei batteri dal suolo è un primo passo importante in molti esperimenti di microbiologia. Una volta isolati, i batteri possono essere ulteriormente analizzati per determinare cose, come la loro specie e la loro funzione nell'ambiente del suolo. Anche una piccola quantità di terreno può contenere milioni di batteri, il che rende necessario diluire un campione di terreno prima di isolare i batteri dal campione.
Misura 100 ml. acqua distillata nel cilindro graduato e aggiungerla alla bottiglia sterile.
Pesare 1 g del campione di terreno e aggiungerlo alla bottiglia di acqua distillata. Tappare bene il flacone e agitarlo per mescolare accuratamente la soluzione.
Etichettare le provette sterili "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5," e "10 ^ - 6." Aggiungi 9 ml di acqua distillata a ciascuna delle provette, usando una delle pipette.
Trasferisci 1 ml della soluzione nella bottiglia nella provetta etichettata "10 ^ -3", usando una nuova pipetta. Tappare la provetta e agitarla delicatamente fino a quando la soluzione non è ben miscelata.
Trasferire 1 ml della soluzione nella provetta "10 ^ -3" nella provetta "10 ^ -4" con una nuova pipetta. Tappare la provetta "10 ^ -4" e agitare per miscelare. Ripetere questo metodo per trasferire la soluzione dal tubo "10 ^ -4" al tubo "10 ^ -5" e quindi dal tubo "10 ^ -5" al tubo "10 ^ -6".
Piastra tre campioni ciascuno dalle provette "10 ^ -4", "10 ^ -5" e "10 ^ -6". Utilizzare una nuova pipetta per trasferire 1 ml di soluzione dal tubo in una piastra di Petri. Aggiungere circa 15 ml di agar nutriente alla piastra; quindi metti il coperchio sulla piastra e agita delicatamente in modo che l'agar copra il fondo della piastra.
Crea una piastra di controllo inserendo 1 ml di acqua distillata in una piastra di Petri, usando una nuova pipetta. Aggiungi agar; metti il coperchio e agita la piastra.
Lascia le piastre di Petri in posizione verticale finché l'agar non si è fissato. Quindi capovolgere le piastre e incubarle, in incubatrice oa temperatura ambiente, per un minimo di 24 ore e fino a cinque giorni.
Rimuovere le piastre dall'incubatrice dopo il tempo desiderato di incubazione. Contare le colonie batteriche su piastre contenenti da 30 a 300 colonie. Usa un pennarello indelebile per contrassegnare le colonie che hai già contato per evitare di contare due volte le stesse colonie.
Dividi il numero di colonie contate dalla diluizione: "10 ^ -4," "10 ^ -5 "o" 10 ^ -6 ": della soluzione del terreno per ogni piastra. Trova il numero di batteri coltivabili nel grammo originale di terreno calcolando la media dei risultati di ciascuna piastra numerabile.
Suggerimenti
Segui le tecniche di laboratorio asettiche durante tutta la procedura .
Avvertenze
Per prevenire la contaminazione e la possibile infezione da batteri, assicurarsi di smaltire correttamente tutte le piastre di Petri, il terreno soluzioni e pipette.
Questa procedura misura solo i batteri coltivabili. Secondo la Cornell University, tra il 90 e il 99 percento dei batteri del suolo non cresceranno sull'agar nutriente.
