1. Siti di riconoscimento specifici:
Gli enzimi di restrizione di tipo II riconoscono e tagliano il DNA a sequenze palindromiche - Sequenze che leggono lo stesso avanti e avanti su fili opposti. Questa specificità consente un taglio preciso del DNA in posizioni specifiche, cruciale per inserire geni nei vettori.
2. Modello di scissione definito:
In genere tagliano il DNA in posizioni specifiche all'interno della loro sequenza di riconoscimento, risultando in entrambi:
* Fine contundente: Entrambi i fili vengono tagliati dritti, lasciando un'estremità schietta.
* Fine appiccicose: L'enzima taglia i fili in modo irregolare, creando straziamenti complementari a singolo filamento ("estremità appiccicose").
3. Prevedibilità:
I modelli di taglio prevedibili consentono ai ricercatori di:
* tagliare il DNA nelle posizioni desiderate per isolamento e inserimento genico.
* Genera estremità compatibili per unire frammenti di DNA da fonti diverse.
4. Disponibilità:
Una vasta gamma di enzimi di restrizione di tipo II è stata identificata e caratterizzata, offrendo una vasta gamma di sequenze di riconoscimento e modelli di scissione, fornendo flessibilità per le strategie di clonazione genica.
Come vengono utilizzati gli enzimi di restrizione di tipo II nella clonazione genica:
1. Isolamento genico: Il gene target è isolato dall'organismo del donatore usando un enzima di restrizione specifico che taglia in un sito all'interno del gene.
2. Preparazione vettoriale: Un vettore adatto (ad es. Plasmide, fagi) viene tagliato con lo stesso enzima di restrizione, creando estremità compatibili.
3. Legation: Il frammento del gene isolato e il vettore linearizzato sono legati insieme usando il DNA ligasi, unendosi ai frammenti di DNA alle loro estremità appiccicose.
4. Trasformazione: Il vettore ricombinante viene introdotto in una cellula ospite (ad esempio batteri), dove replica ed esprime il gene inserito.
In sintesi: Gli enzimi di restrizione di tipo II sono indispensabili per la clonazione genica a causa del loro:
* Specificità: Taglio preciso a sequenze di DNA specifiche.
* prevedibilità: Modelli di scissione coerenti per risultati prevedibili.
* Disponibilità: Una vasta gamma di enzimi per diverse applicazioni.
Facilitano la manipolazione controllata del DNA, consentendo l'inserimento e l'espressione di geni stranieri nei nuovi ospiti, formando le basi della moderna biotecnologia.
