Il brodo nutriente liquido viene utilizzato per la coltura di batteri come l'Escherichia coli. Le ricette per questo brodo variano a seconda delle specie batteriche e della presenza di modificazioni genetiche, ad es. Resistenza agli antibiotici. Il brodo può essere solidificato aggiungendo l'agar, che consente ai batteri di formare colonie distinte, mentre nella coltura liquida si disperdono semplicemente in tutto il volume. Questa è una tecnica basilare ma essenziale per metodi avanzati come la clonazione genica oi test microbiologici. Questo articolo presume che i ceppi standard di Escherichia coli da laboratorio debbano essere coltivati su piastre di agar Luria (LB) (o capsule di Petri).
Pesare 10 grammi di triptone batterico, 5 grammi di estratto di lievito, 5 grammi di cloruro di sodio, 15 grammi di agar o agarosio e 1 millilitro di idrossido di sodio 1N. Mescolare questi con un volume di acqua sterile distillata e sterilizzata in autoclave fino a ottenere 1 litro di terreno. Sterilizzare in autoclave il materiale in flaconi o flaconi senza tappo per 25 minuti. Lasciare raffreddare a circa 50 gradi Celsius prima di aggiungere reagenti che saranno distrutti a fuoco vivo, come antibiotici o altri supplementi nutrizionali.
Consentire ai media autoclavati di raffreddarsi a 50 gradi Celsius e non inferiore a 45 gradi Celsius , come l'agar si metterà nel suo contenitore prima che possa essere versato. Procurati piatti Petri sterili e versa quanto basta per coprire l'intera area della piastra e almeno la metà della sua profondità. Evitare di riempire eccessivamente le piastre e preferibilmente non lasciare che l'agar entri in contatto con il bordo superiore del piatto. Lasciare solidificare le piastre in un ambiente sterile (ad esempio sotto una cappa a flusso laminare) lasciando i coperchi in un angolo del cappuccio.
Asciugare le piastre. Sebbene le piastre possano essere utilizzate non appena vengono impostate, sulla superficie dell'agar sarà presente dell'umidità, che impedirà alle colonie batteriche di aderire sufficientemente. Pertanto, è meglio asciugare le piastre prima di applicare qualsiasi batterio, ad esempio lasciandole a temperatura ambiente per alcuni giorni o per mezz'ora sotto una cappa a flusso laminare o in un incubatore a 37 gradi Celsius.
Conserva le piastre. Le piastre essiccate devono essere impilate capovolte (capovolte) sui loro coperchi e reinserite nell'imballaggio originale, chiuse con nastro adesivo e avvolte in un foglio di alluminio per proteggerle dalla luce o in un contenitore appropriato. Scrivi sempre la data di preparazione sui piatti ed evita di usare se le piastre hanno più di 2 mesi.
Suggerimento
Esegui il maggior numero possibile di passaggi precedenti (preferibilmente tutti) entro un ambiente sterile (ad es. sotto una fiamma aperta o una cappa a flusso laminare) per impedire l'ingresso e la crescita di sostanze contaminanti batteriche presenti nell'aria.
