Tris, o tris (idrossimetil) amminometano, è un tampone biologico comune, utilizzato in tutto il processo di estrazione del DNA. Durante l'estrazione da un numero qualsiasi di fonti, il DNA è sensibile al pH. Durante la lisi cellulare, la rimozione di componenti cellulari indesiderati e la precipitazione, il tris viene utilizzato per mantenere un pH stabile. Inoltre, svolge un ruolo particolarmente importante nella lisi cellulare.

TL; DR (troppo lungo, non letto)

L'estrazione del DNA è un processo sensibile al pH e utilizza un buffer tris aiuta a mantenere stabile il pH rispetto alla lisi cellulare e all'estrazione.

Tris come tampone

Poiché il pH può influenzare ed essere influenzato da numerosi fattori cellulari, il mantenimento di un pH stabile è essenziale per la scienza sperimentale . I tamponi biologici, come il tris, sono importanti perché possono mantenere un pH stabile nonostante le influenze che potrebbero altrimenti spostare il pH. Il tris (idrossimetil) amminometano, con un pKa di 8,1, è un tampone efficace tra pH 7 e 9. A causa del suo intervallo neutro, il tris è un tampone comunemente usato nei laboratori biologici. Tuttavia, il tampone tris è sensibile alla temperatura e dovrebbe essere usato alla temperatura alla quale è stato originariamente sottoposto a pH per evitare l'inaccuratezza.

Lisi delle cellule

Lysis, o rompere le cellule aperte, è il primo passo dell'estrazione del DNA. Ciò è ottenuto da un tampone contenente tris ed EDTA (acido etilendiamminotetracetico). L'EDTA lega cationi bivalenti come calcio e magnesio. Poiché questi ioni aiutano a mantenere l'integrità della membrana cellulare, eliminarli con EDTA destabilizza la membrana. Tris è il principale componente di buffering; il suo ruolo principale è quello di mantenere il pH del buffer in un punto stabile, di solito 8,0. Inoltre, tris probabilmente interagisce con l'LPS (lipopolisaccaride) nella membrana, servendo a destabilizzare ulteriormente la membrana.

Tris protegge il DNA dai cambiamenti di pH

Quando le cellule si rompono, il loro DNA e il contenuto si riversa nel buffer. Inoltre, RNasi A (distrugge l'RNA), proteasi (distrugge le proteine) e SDS (sodio dodecil solfato, solubilizza i frammenti della membrana) sono spesso inclusi. Presi insieme, questa zuppa di contenuto cellulare e RNA e proteine ​​frammentate può avere un grande impatto sul pH della soluzione. Poiché il DNA è sensibile al pH, è importante che tris tamponi il brodo e mantenga il pH a un punto fermo.

Precipitazione del DNA

Nella fase finale dell'estrazione del DNA, il DNA stesso è estratto dalla soluzione. A questo punto, il DNA è solubile nel buffer. Per estrarre dalla soluzione, il DNA è reso insolubile aggiungendo etanolo o isopropanolo (alcool isopropilico). Quando questo è fatto, il DNA diventa ovvio in soluzione come una sostanza bianca. Sebbene il DNA possa essere isolato dai restanti componenti cellulari in questo modo, non è "utilizzabile" quando è insolubile. Dopo l'isolamento, l'alcol viene rimosso e il DNA deve essere restituito a un tampone biologico, come tris, da utilizzare.

Fai da te

Sebbene l'estrazione del DNA sia comunemente eseguita nei laboratori di ricerca generalmente utilizzando uno dei numerosi kit disponibili in commercio, chiunque può eseguire l'estrazione del DNA a casa utilizzando oggetti domestici comuni e piselli o spinaci. In questo caso, tris, né alcun buffer biologico, non è presente per proteggere il DNA dagli spostamenti del pH. Tuttavia, è un modo visivo di aiutare gli studenti a connettersi con il DNA cellulare.