Comprensione del processo
* Estrazione: La xanthophyll viene estratta da un materiale di origine (ad es. Foglie di piante) usando etanolo.
* Spettrofotometria: La concentrazione di xanthophyll nella soluzione di etanolo viene determinata usando uno spettrofotometro. La xanthophyll assorbe la luce a lunghezze d'onda specifiche e la quantità di luce assorbita è proporzionale alla sua concentrazione.
Metodi
Ecco due metodi comuni per il calcolo della concentrazione di xanthophyll:
1. Utilizzando una curva standard
* Preparare una soluzione standard: Ottieni uno standard di xanthophyll puro. Sciogliere un peso noto dello standard in etanolo per creare una soluzione madre di concentrazione nota.
* Crea una curva standard: Diluire la soluzione madre per creare una serie di soluzioni con concentrazioni note (ad es. 10, 20, 30, 40, 50 µg/mL).
* Assorbanza di misura: Utilizzare uno spettrofotometro per misurare l'assorbanza di ciascuna soluzione standard alla lunghezza d'onda di assorbanza massima per xanthophyll (in genere circa 440-450 nm).
* Traccia la curva standard: Traccia i valori di assorbanza sull'asse Y e le concentrazioni corrispondenti sull'asse x. Ciò creerà una relazione lineare tra assorbanza e concentrazione.
* Misura un campione sconosciuto: Esegui il campione Xanthophyll estratto attraverso lo spettrofotometro alla stessa lunghezza d'onda. Trova la concentrazione corrispondente sulla curva standard in base all'assorbanza misurata.
2. Usando la legge della birra-lambert
* Legge di birra-lambert: Questa legge afferma che l'assorbanza (a) è direttamente proporzionale alla concentrazione (c) dell'analita e alla lunghezza del percorso (L) della raggio di luce attraverso la soluzione. L'equazione è:a =εcl, dove ε è l'assorbimento molare (una costante specifica per l'analita).
* Determina l'assorbimento molare (ε): Questo valore è in genere fornito in letteratura o può essere determinato sperimentalmente usando una soluzione standard.
* Assorbanza di misura: Misura l'assorbanza del campione di xanthophyll estratto alla massima lunghezza d'onda di assorbanza.
* Calcola la concentrazione: Riorganizzare l'equazione della legge della birra-Lambert per risolvere per la concentrazione:c =a / (εl).
Considerazioni:
* Efficienza di estrazione: Assicurarsi che il processo di estrazione sia efficiente e che tutta la xanthophyll sia stata estratta dal materiale di origine.
* Puralità del solvente: Usa etanolo di alta qualità per evitare interferenze dalle impurità.
* Calibrazione: Calibrare sempre lo spettrofotometro prima delle misurazioni per garantire risultati accurati.
* Selezione della lunghezza d'onda: Scegli la lunghezza d'onda corretta per la massima assorbanza di Xanthophyll (di solito circa 440-450 nm).
* Composti interferenti: Tieni presente che altri pigmenti nel campione potrebbero assorbire a lunghezze d'onda simili. Se necessario, utilizzare un metodo per separare la xanthophyll da questi composti interferenti.
Calcolo di esempio:
Supponiamo che tu abbia un estratto di Xanthophyll in etanolo con un'assorbanza di 0,500 a 450 nm. L'assorbimento molare (ε) di xanthophyll a 450 nm è di 25.000 m⁻¹cm⁻¹ e la lunghezza del percorso (L) della cuvetta è di 1 cm.
Usando la legge della birra-lambert:
c =a / (εl)
c =0,500 / (25.000 m⁻¹cm⁻¹ × 1 cm)
C =2,0 × 10⁻⁵ m (o 20 µm)
Nota importante: Questo è un esempio semplificato. Il metodo e i calcoli specifici dipenderanno dalle circostanze specifiche e dall'attrezzatura che si sta utilizzando. Consultare sempre la letteratura e i protocolli pertinenti per risultati accurati.
