Comprendere le nozioni di base
* Tris-HCl: Questa è una soluzione tampone ottenuta combinando Tris (tris(idrossimetil)aminometano) con acido cloridrico (HCl).
* 10 mm: Questo sta per 10 millimolari, che indica la concentrazione della soluzione. Significa che ci sono 10 millimoli di Tris-HCl per litro di soluzione.
Materiali
* Base Tris (base libera): Avrai bisogno di una quantità specifica di polvere base Tris.
* Acido cloridrico (HCl): Avrai bisogno di una soluzione concentrata di HCl (solitamente 1M o 12M).
* Acqua deionizzata: Utilizzare acqua deionizzata di alta qualità per garantire la precisione.
* Cilindro graduato: Per misurare accuratamente i volumi.
* Bilancia: Per pesare con precisione la polvere base Tris.
* misuratore di pH (opzionale): Per una regolazione precisa del pH.
Calcoli
1. Peso molecolare della base Tris: Il peso molecolare della base Tris è 121,14 g/mol.
2. Calcola la massa della base Tris necessaria: Utilizzerai la seguente formula per calcolare la massa della base Tris:
* Massa (g) =(Concentrazione (mM) × Peso molecolare (g/mol) × Volume (L)) / 1000
* Per una soluzione da 10 mM in 1 litro (1000 ml):
* Massa =(10 mM × 121,14 g/mol × 1 L) / 1000
* Massa =1,2114 g
Procedura
1. Pesare la base Tris: Pesare attentamente la quantità calcolata di Tris base (1,2114 g per 1 litro).
2. Sciogliere la base Tris in acqua: Aggiungere la base Tris a circa 800 ml di acqua deionizzata in un contenitore idoneo. Mescolare finché la polvere non si scioglie completamente.
3. Regolare il pH:
* Utilizzo di un pHmetro: Aggiungere goccia a goccia HCl concentrato alla soluzione Tris monitorando costantemente il pH con un pHmetro. Regolare il pH sul valore desiderato (solitamente tra 7,5 e 8,5 per i tamponi Tris-HCl).
* Senza pHmetro: Aggiungere circa 0,5 ml di HCl concentrato (per una soluzione da 1 L). Mescolare la soluzione e controllare il pH utilizzando una cartina pH. Regolare di conseguenza il volume di HCl fino al raggiungimento del pH desiderato.
4. Portare la soluzione al volume finale: Dopo aver regolato il pH, aggiungere acqua deionizzata per portare il volume totale della soluzione a 1 litro.
5. Sterilizzazione: Se necessario, sterilizzare la soluzione in autoclave.
Note importanti
* Regolazione del pH: La quantità esatta di HCl necessaria per raggiungere il pH desiderato varierà leggermente a seconda della purezza della base Tris e della concentrazione della soluzione di HCl.
* Precisione: Utilizzare bilance precise e cilindri graduati per garantire una preparazione precisa.
* Conservazione: Conservare la soluzione Tris-HCl a temperatura ambiente o in frigorifero.
* Durata di validità: Le soluzioni Tris-HCl generalmente hanno una buona durata di conservazione, ma è sempre meglio verificare eventuali segni di degradazione (ad esempio scolorimento, torbidità).
Fammi sapere se hai domande o desideri preparare una concentrazione o un volume diverso di soluzione Tris-HCl. Felice di aiutarti!
