Di Tammie Painter • Aggiornato il 24 marzo 2022
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La cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) e la gascromatografia (GC) sono tecniche analitiche fondamentali che separano le molecole in base alla loro interazione con una fase stazionaria e una fase mobile. Sebbene il principio fondamentale (composti più pesanti o meno polari che eluiscono più lentamente) rimanga identico, i due metodi differiscono notevolmente nei parametri operativi, nella progettazione della colonna e nella compatibilità dei campioni.
L'HPLC impiega una fase mobile liquida, tipicamente una miscela di solvente organico (ad esempio, acetonitrile o metanolo), acqua ultrapura e additivi che ottimizzano la solubilità e la compatibilità con l'analita. Al contrario, la GC utilizza una fase mobile gassosa; i trasportatori comuni includono elio, azoto, argon o idrogeno, scelti in base alla volatilità dell'analita e ai requisiti del rivelatore.
Le colonne HPLC sono solitamente tubi di metallo o di vetro lunghi 4-6 pollici, riempiti con silice o fasi stazionarie polimeriche. Le colonne GC, invece, sono tubi capillari a spirale le cui pareti interne sono rivestite con fasi stazionarie adatte all'analisi. Questi capillari possono estendersi fino a 100 piedi, fornendo un'alta risoluzione per i composti volatili.
La GC è ideale per analiti volatili e termicamente stabili:piccole molecole organiche, gas e liquidi bassobollenti. Le specie non volatili, ad alto peso molecolare o cariche (ad esempio sali, peptidi) sono più adatte all'HPLC, che può gestire matrici acquose e ioniche senza la necessità di derivatizzazione.
Le colonne GC risiedono all'interno di un forno; la temperatura è programmata con precisione per ottimizzare la separazione, con temperature più elevate che accelerano l'eluizione ma rischiano la degradazione dell'analita. Le colonne HPLC vengono generalmente mantenute a temperatura ambiente o controllata, garantendo un'interazione coerente tra fase mobile e fase stazionaria.
