Il calcolo dei titoli virali è un modo complicato per dire che uno scienziato sta contando il numero di virus in un particolare campione. Per calcolare i titoli virali, gli scienziati infettano piastre di batteri in crescita con soluzioni virali a varie concentrazioni e individuano il numero di virus nella soluzione originale contando i batteri morti a causa dell'infezione virale.

Diluizioni seriali

Indossare i guanti, riempire 10 tubi di coltura con 9 ml di brodo e etichettarli "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3," e così via fino a "10 ^ - 10. "Queste provette verranno utilizzate per diluizioni seriali virali. Poiché i virus possono raggiungere concentrazioni incredibilmente alte, è necessario diluirli per contarli in modo efficace. Ogni provetta rappresenta una diluizione dieci volte maggiore del virus.

Prendi 1 ml della coltura virale che vuoi titre e trasferiscilo nella provetta "10 ^ -1" con una pipetta. Mescola bene la provetta. Questa è la tua prima diluizione di dieci volte.

Prendi 1 ml di coltura mista dalla tua provetta con etichetta "10 ^ -1" e trasferiscilo con una nuova pipetta nella provetta successiva, con l'etichetta "10 ^ -2 . "Mescola anche questo tube.

Continua questo modello per creare una serie di diluizioni seriali. Finirai con 9 tubi da 9 ml e 1 tubo da 10 ml. I carichi virali nelle tue provette saranno diluiti ovunque da 10 volte (il tuo primo tubo) o 100 volte (il tuo secondo tubo) a dieci miliardi di volte (il tuo ultimo tubo).

Preparazione delle piastre

Prendi 10 tubi di tryptone soft agar e 10 piastre di Petri e etichettali in modo che corrispondano alle tue provette di diluizione seriali.

Allenta i tappi in modo che non si aprano al calore e poi posiziona i tubi di agar in un becher di acqua bollente. Questo scioglierà l'agar in modo da poterlo versare nelle piastre di Petri.

Trasferisci le tue tube in un bagno di acqua calda con un minimo di 45 gradi Celsius. Ciò assicurerà che il tuo agar non si solidifichi nei tubi prima che tu abbia la possibilità di versarlo in una capsula di Petri.

Aggiungi due gocce di coltura batterica al tuo agar e mescola delicatamente. Questi sono i batteri che verranno uccisi, consentendo di contare il numero di particelle virali in una particolare soluzione.

Aggiungere 1 ml di ciascuna diluizione seriale alla corrispondente provetta di agar mentre le provette sono ancora nell'acqua calda bagno. Ad esempio, 1 ml della tua diluizione seriale 10 ^ -1 dovrebbe entrare nella provetta con agar indicata con "10 ^ -1".

Miscelare ciascun tubo e quindi versare ciascun tubo nella piastra di Petri con l'etichetta corrispondente. Questo creerà un sottile strato di agar che è stato inoculato con batteri e virus in ogni piastra. Lascia che le piastre crescano durante la notte in un incubatore.

Conteggio e calcolo dei titoli

Porta i piatti fuori dall'incubatrice ed esaminali. Dovresti vedere aree nuvolose in tutta la piastra dove sono cresciuti i batteri, tranne che per piccoli punti chiari chiamati placche. Queste placche sono chiazze di batteri morti e ogni placca rappresenta un virus.

Trova una placca che abbia tra 30 e 300 placche e contati il ​​numero esatto di placche su quella lastra.

Prendi il numero di placche nel piatto e moltiplicare per 10. Se contate 157 placche, otterreste 1570.

Moltiplicate il numero ottenuto nel passaggio precedente per l'inverso del numero sul tubo di diluizione. Ad esempio, se la piastra selezionata era la piastra 10 ^ -5, moltiplicherebbe 1570 per 10 ^ 5 per ottenere 157000000. Questo numero finale è il titolo del virus e rappresenta il numero di virus per ml della tua cultura originale.

Avviso

Fai attenzione quando lavori con i virus. Non tutti i virus sono pericolosi, ma è necessario prendere precauzioni. Cambia spesso i guanti. Pulire immediatamente eventuali fuoriuscite e disinfettare l'area.