Il motivo principale per cui si macchia un campione prima di metterlo sotto il microscopio è di esaminarlo meglio, ma la colorazione fa molto di più che evidenziare semplicemente i contorni delle cellule. Alcune macchie possono penetrare nelle pareti cellulari ed evidenziare i componenti cellulari, e questo può aiutare gli scienziati a visualizzare i processi metabolici. Le macchie aiutano anche a distinguere tra cellule vive e quelle morte. Inoltre, la colorazione consente agli scienziati di contare il numero di cellule di un tipo particolare all'interno di una certa biomassa. Esistono venti o più tipi diversi di macchie e ognuno ha il suo scopo.
TL; DR (Troppo lungo, non letto)
Lo scopo principale della colorazione è evidenziare le celle e parti di celle. Esistono oltre 20 diversi tipi di macchie e il tipo di macchia che si utilizza dipende da ciò che si sta cercando.
Tipi di macchie
La scelta della macchia dipende da ciò che si sta cercando. Non tutte le macchie sono adatte per le cellule viventi, ma quelle che includono Bismarck marrone, rosso toluene, blu Nilo e rosso Nilo e alcune fluorescenti utilizzate per evidenziare il DNA. Alcune macchie evidenziano spore, alcune rilevano lipidi e proteine e alcune cambiano colore in presenza di amidi. Lo scopo dell'esame determina il miglior tipo di macchia da usare. Ad esempio, un medico che esegue uno striscio di PAP utilizzerà Eosina Y. È un colorante fluorescente acido che diventa rosso quando contatta globuli rossi, citoplasma e membrane cellulari. È anche usato per testare il midollo del sangue.
In alcuni casi, un investigatore può usare più di una macchia. Ad esempio, l'ematossilina è una macchia che trasforma i nuclei delle cellule in blu. Se usato in combinazione con eosina, che trasforma le altre parti della cella in rosso o in rosa, fornisce un contrasto più forte e rende più facile la differenziazione dei nuclei. Pap test e campioni di midollo sono più facili da esaminare quando queste due macchie vengono utilizzate insieme.
Macchia di Gram: gli operatori ospedalieri usano la colorazione di Gram per identificare i batteri nocivi. Questa è in realtà una serie di coloranti che hanno effetti diversi su diversi tipi di batteri e danno ai medici un importante strumento diagnostico. La colorazione di Gram è un processo in tre parti. Nel primo, viene aggiunto il cristallo viola di Hucker, che colora tutti i batteri di un colore viola uniforme. Nella fase successiva, viene aggiunta la colorazione di iodio, che fa aderire il colore alle cellule Gram-positive, che sono principalmente Staphylococcus e Streptococcus. La macchia viene lavata via, lasciando le cellule Gram-positive con un distinto colore viola; quindi una terza macchia, Safranine O, viene introdotta per migliorare il contrasto tra i batteri Gram-negativi e il resto del materiale nella diapositiva.
Procedura di colorazione
Quando si prepara un campione su un scorri, puoi montarlo a secco o montarlo a umido, puoi dividerlo in una sezione sottile o macchiarlo. Quando si utilizza una macchia, la procedura abituale è quella di montare a umido il campione, il che significa posizionare una goccia d'acqua sul vetrino, posizionare il campione nell'acqua e coprirlo con un vetrino coprioggetto. Quindi applica la macchia su un angolo della diapositiva con un contagocce e lascia che sia disegnata verso il campione per azione capillare. Aiuta a mettere un tovagliolo di carta sul lato opposto della diapositiva per attirare l'acqua. Una volta che la macchia si è diffusa su tutta la diapositiva, il campione è pronto per essere esaminato.
