Ti sei mai chiesto come gli scienziati studiano minuscoli frammenti come il tuo DNA? Un metodo è l'elettroforesi su gel. Mentre l'elettroforesi produce solitamente bande chiare e facili da leggere perfette per l'interpretazione scientifica, i risultati macchiati a volte oscurano i dati.

TL; DR (troppo lungo, non letto)

Elettroforesi su gel consente agli scienziati di visualizzare campioni digeriti e misurare le dimensioni dei frammenti. Spalmare i risultati di gel di agarosio preparati in modo non corretto, caricare un campione non diluito nei pozzetti o utilizzare campioni di scarsa qualità.

Cos'è l'elettroforesi?

L'elettroforesi su gel è un modo per gli scienziati di visualizzare campioni digeriti di piccole molecole come il DNA e stimano le dimensioni di questi frammenti. Per eseguire l'elettroforesi, gli scienziati preparano un gel sospendendo l'agarosio in acqua bollente. La polimerizzazione risultante produce polimeri di zucchero incrociato in modo che il gel assomigli un po 'a una ragnatela a livello chimico.

Gli scienziati usano uno strumento di taglio per formare pozzi nel gel in modo che possano caricare quantità molto piccole di campioni digeriti nei pozzi. L'accensione della macchina fa scorrere l'elettricità attraverso il gel e i frammenti nei campioni iniziano a spostarsi dai pozzetti all'altro lato del gel. Poiché il gel è simile al web, i frammenti più piccoli viaggiano rapidamente attraverso la matrice, mentre i frammenti più grandi impiegano più tempo a salire attraverso la matrice. Al termine, il gel contiene bande scure che rappresentano la distanza tra i diversi frammenti. Gli scienziati misurano queste bande e usano un calcolo logaritmico per determinare le dimensioni di ciascun frammento in base alla migrazione.

Gli scienziati sperano in bande chiare, ma a volte le bande si diffondono. Questa sbavatura è solitamente il risultato di gel scarsamente preparati, di caricamento di campioni non diluiti nei pozzetti o di campioni di scarsa qualità.

Preparazione del gel insoddisfacente

Quando si tratta di risultati spalmati, un probabile colpevole è scarsamente gel preparato Un gel soddisfacente polimerizza in modo uniforme, producendo una matrice uniforme in tutto il gel nel vassoio di colata. Se una parte del gel - di solito la metà inferiore - prima che lo scienziato finisca di versare l'intero vassoio, il gel risultante sarà irregolare e produrrà risultati macchiati.

Troppo campione

Prima di caricare i campioni nei pozzetti, quei campioni devono essere abbastanza diluiti per scorrere attraverso il gel senza traboccare i pozzetti. Se un campione caricato è troppo concentrato perché lo scienziato ha dimenticato di diluirlo o ha utilizzato un fattore di diluizione improprio, i frammenti saranno troppo grandi per i pozzetti e produrre sbavature.

Campione di qualità scadente

Macchiatura deriva anche dalla scarsa qualità del campione. Ad esempio, un campione di DNA contaminato con proteine ​​o contenente troppo sale può produrre sbavature. I campioni degradati o denaturati forniscono anche risultati scarsi, comprese le bande spalmate.

L'elettroforesi su gel è un modo straordinario per gli scienziati di visualizzare campioni digeriti e determinare le dimensioni dei frammenti. Un'accurata preparazione sia del gel che del campione minimizza la possibilità di sbavature e produce bande chiare ideali per l'interpretazione scientifica.