Di Chris Deziel Aggiornato il 24 marzo 2022
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La colorazione di un campione prima dell'esame microscopico migliora principalmente la visibilità, ma i suoi benefici si estendono ben oltre il semplice delineamento dei confini cellulari.
Alcuni coloranti permeano le pareti cellulari, illuminando le strutture interne e consentendo ai ricercatori di osservare l'attività metabolica in situ.
Inoltre, le colorazioni discriminano tra cellule vitali e non vitali.
Inoltre, la colorazione facilita l'enumerazione precisa di popolazioni cellulari specifiche all'interno di una determinata biomassa.
Sono disponibili oltre 20 reagenti di colorazione distinti, ciascuno su misura per un particolare obiettivo diagnostico o di ricerca.
La colorazione accentua le strutture cellulari; la selezione dei reagenti dipende dall'obiettivo analitico.
La scelta della tinta dipende dalla caratteristica specifica che desideri visualizzare. Non tutti i coloranti sono compatibili con le cellule viventi, ma quelli che lo sono, tra cui il marrone Bismarck, il rosso toluene, il blu Nilo, il rosso Nilo e i fluorescenti leganti il DNA, sono ampiamente utilizzati in citologia e istologia.
Alcune macchie prendono di mira le spore, altre evidenziano lipidi o proteine, mentre alcune cambiano colore in presenza di amidi. Ad esempio, un medico che esegue un PAP test applicherebbe l'eosina Y, un colorante fluorescente acido che diventa rosso brillante contro i globuli rossi, il citoplasma e le membrane cellulari. L'eosina Y viene utilizzata di routine anche nell'analisi dell'aspirato di midollo osseo.
In molti casi, una sola macchia non è sufficiente. L'ematossilina, ad esempio, colora i nuclei di blu e, se abbinata all'eosina, produce uno sfondo rosso o rosa contrastante che fa risaltare nettamente i nuclei. La colorazione combinata ematossilina-eosina (H&E) è un punto fermo in patologia per l'esame dell'architettura dei tessuti.
La procedura di colorazione di Gram è una pietra miliare della microbiologia clinica, poiché consente la rapida identificazione dei batteri patogeni. La tecnica utilizza una serie di coloranti che colorano in modo differenziale gli organismi Gram-positivi e Gram-negativi.
Per prima cosa viene applicato il cristalvioletto, colorando tutte le cellule di un viola uniforme. Successivamente, lo iodio agisce come un mordente, bloccando il colorante negli spessi strati di peptidoglicani dei batteri Gram-positivi, in genere Staphylococcus e Streptococcus, in modo che il viola rimanga dopo la decolorazione. Infine, un colorante di contrasto come SafranineO conferisce una tonalità rossa o rosa alle cellule Gram-negative, creando un chiaro contrasto tra i due gruppi.
La preparazione dei campioni può comportare il montaggio a secco, il montaggio a umido, il sezionamento o lo striscio. Per la maggior parte dei protocolli di colorazione, è preferibile il montaggio a umido:posizionare una goccia di acqua distillata sul vetrino, posizionare il campione e coprire con un coprioggetto. Applicare una goccia della soluzione colorante su un angolo; l'azione capillare attira il colorante attraverso il campione. Posizionare un tovagliolo di carta sul lato opposto del vetrino aiuta a eliminare il liquido in eccesso, garantendo una distribuzione uniforme. Una volta che la macchia è completamente penetrata, il vetrino è pronto per la valutazione al microscopio.
