Escherichia coli, E. coli, è un batterio che cresce nell'intestino inferiore dei mammiferi. Questo batterio fu scoperto per la prima volta alla fine del 1800. Da allora, ha avuto una lunga storia di utilizzo nella ricerca scientifica. È l'organismo più utilizzato nella genetica molecolare. Parte del motivo per cui E. coli è comunemente usato nella ricerca scientifica è che è facile crescere in laboratorio. I fattori che rendono facile la crescita di E. coli sono le sue semplici esigenze nutrizionali, il rapido tasso di crescita e le sue moderate esigenze di mantenimento.

Sterilizza il ciclo di inoculazione ponendolo nella fiamma del becco Bunsen. Passa la metà inferiore del loop attraverso la fiamma finché non diventa rosso.

Lascia raffreddare il loop. Puoi toccarlo con l'agar sterile sulla piastra per assicurarti che si sia raffreddato. Non posizionare il cappio sul tavolo o lasciare che venga a contatto con qualcosa diverso dall'agar sterile o dalla coltura desiderata ora che è stato sterilizzato.

Immergere il ciclo nella coltura di E. coli e quindi rimuoverlo.

Aprire la piastra di agar e far scorrere delicatamente il loop avanti e indietro sulla superficie di una sezione dell'agar. Fare attenzione a non graffiare l'agar con il loop. L'agar fornisce le sostanze nutritive che l'E. coli ha bisogno di crescere.

Metti di nuovo il ciclo nella fiamma del becco Bunsen per sterilizzarlo. Una volta che l'asta del ciclo si raffredda, toccala su una sezione sterile della piastra per assicurarti che sia fredda, quindi fai scivolare l'anello attraverso la prima striscia per creare una seconda striscia. Questa seconda serie è una versione diluita della prima serie. Ripetere questo processo di sterilizzazione e di scorrimento fino a quando diverse sezioni della piastra di agar sono state scivolate sopra. La ragione per cui lo fai è così che puoi scegliere in seguito da singole colonie clonali. Ciò ti aiuterà ad avere almeno una sezione che ha colonie individuali - non troppo concentrate (che avranno una crescita eccessiva e non ti permetteranno di scegliere da una singola colonia) e non troppo diluite (che non darebbero colonie) .

Sterilizza il cappio nella fiamma un'ultima volta prima di metterlo da parte nell'area di lavoro.

Metti la sommità sulla piastra di agar. Capovolgere la piastra e posizionarla nell'incubatrice impostata su 37 gradi Celsius (98,6 gradi Fahrenheit). Questa temperatura di incubazione ideale simula la temperatura del corpo umano in cui risiede E. coli. Entro 24-48 ore compariranno colonie visibili di batteri di E. coli nella piastra di agar.

Avvertenza

Un adeguato contenimento dei campioni di E. coli e la sterilizzazione del ciclo di inoculo ridurranno il possibilità di diffondere i batteri. Nessun cibo o bevanda dovrebbe essere consumato nell'area dell'esperimento. Indossare guanti riduce ulteriormente il rischio di contaminazione delle mani.