L'agar è una sostanza gelatinosa derivata dalle pareti cellulari purificate delle alghe rosse. Viene aggiunto ai media microbiologici, che sono materiali su cui i microrganismi vengono coltivati nei laboratori, al fine di fornire più di una solida struttura alla sostanza. L'agar non ha valore nutritivo, quindi quando gli scienziati lo usano per coltivare microrganismi, aggiungono varie sostanze nutritive per aumentare la crescita batterica nelle piastre di Petri o nelle provette. Quando i ricercatori immagazzinano i batteri in una provetta, si parla di inclinazione dell'agar perché il mezzo di crescita liquido si solidifica mentre il tubo si trova in una posizione inclinata. Un tappo a vite sull'incavo impedisce all'arido di seccarsi.
Preparazione del terreno
Il terreno è preparato diversamente per gli slant rispetto alle piastre di Petri. La sterilizzazione viene eseguita con l'agar nei tubi; le piastre di Petri sono pre-sterilizzate prima che l'agar sterilizzato venga versato in esse. Misurare la quantità di acqua necessaria e metterla in una beuta erlenmeyer. Scaldalo su un fornello finché non bolle quasi. Aggiungere altri ingredienti se necessario e mescolare il composto lentamente e costantemente fino a quando non si sciolgono. Questi ingredienti possono includere estratto di manzo, peptone e tamponi di pH, a seconda del tipo di microrganismo che viene coltivato.
Aggiungere l'agar
Prima di aggiungere la polvere di agar disidratato, mescolare con una piccola quantità di acqua distillata fredda per evitare il formarsi di grumi. Usare cautela quando si aggiunge l'agar al liquido caldo poiché può spumeggiare e traboccare dal vaso. Aggiungere piccole quantità di agar alla volta e mescolare per distribuire uniformemente l'agar. Spegnere il fuoco quando la miscela inizia a vaporizzare, prima che bolle.
Tubi di sterilizzazione
Posizionare le provette non coperte su un portaprovette. Riempire le provette trasferendo circa 5 millilitri - circa 0,17 once o 1 cucchiaino da tè - di agar fuso dalla pentola usando una pipetta sterile. Tappare liberamente ciascuna provetta, poiché l'agar non sarà sterilizzato se sigillato ermeticamente. Sterilizzare tutte le provette in un'autoclave per circa 25 minuti a 121 gradi Celsius o 250 gradi Fahrenheit.
Conservare in una posizione inclinata
Quando l'agar è ancora caldo, inclinare delicatamente il rack tenendo premuto le provette su una superficie solida o un libro spesso, assicurandosi che il mezzo all'interno dei tubi sia in una posizione inclinata rispetto alle provette. Lasciare raffreddare e solidificare il terreno a questo angolo, che aumenta la superficie dell'agar. Stringere i cappucci delle provette dopo che l'agar si è raffreddato. Gli slant sono pronti per l'uso una volta che l'agar si è solidificato. Possono essere conservati a temperatura ambiente o in frigorifero per un uso futuro.
Inoculare l'inclinazione
Inoculare l'inclinazione trasferendo le cellule con un'ansa da inoculo da un microrganismo a singola colonia su un la superficie inclinata. Spostare il cappio attraverso la superficie del taglio e ricapitolare i tubi. Incubare l'inclinazione fino a quando non vi è evidenza di crescita, quindi mettere la provetta in frigorifero.
