La reazione tra tiosolfato e iodio può essere rappresentata dalla seguente equazione:
2S2O3^2- + I2 → S4O6^2- + 2I^-
Al termine della titolazione, tutto il tiosolfato ha reagito con lo iodio, quindi non ci saranno più ioni S2O3^2- nella soluzione. Ciò significa che qualsiasi ulteriore iodio aggiunto non reagirà con il tiosolfato e rimarrà invece in soluzione come molecole I2. Queste molecole I2 assorbiranno la luce nello spettro visibile, conferendo alla soluzione un colore blu.
La formazione degli ioni triioduro può essere rappresentata dalla seguente equazione:
I2 + I- → I3^-
Gli ioni I3- sono anche responsabili del colore blu della soluzione.