1. Preparazione della colonna a scambio ionico:
- Una colonna a scambio ionico è riempita con una resina contenente gruppi carichi che possono attrarre e legarsi a molecole (ioni) con carica opposta.
- La resina può essere caricata positivamente (resina a scambio cationico) o caricata negativamente (resina a scambio anionico).
2. Applicazione di esempio:
- La miscela o il campione di aminoacidi viene applicato alla colonna a scambio ionico.
3. Soluzioni tampone:
- Attraverso la colonna vengono fatte passare diverse soluzioni tampone con pH e concentrazioni saline variabili.
4. Interazione elettrostatica:
- Gli amminoacidi hanno cariche nette diverse a diversi valori di pH a causa della presenza di vari gruppi funzionali carichi.
- Mentre le soluzioni tampone passano attraverso la colonna, gli amminoacidi interagiscono con i gruppi carichi della resina in base alle loro cariche nette.
- Gli amminoacidi caricati positivamente (cationi) si legheranno alla resina caricata negativamente nella cromatografia a scambio cationico, mentre gli amminoacidi caricati negativamente (anioni) si legheranno alla resina caricata positivamente nella cromatografia a scambio anionico.
5. Eluizione:
- Modificando il pH o la concentrazione salina delle soluzioni tampone è possibile modificare la forza delle interazioni elettrostatiche tra gli aminoacidi e la resina.
- Quando le condizioni del tampone cambiano, diversi amminoacidi verranno eluiti (lavati via) dalla colonna in tempi diversi.
- Questo processo di eluizione separa gli amminoacidi in base alle loro differenze di carica.
6. Rilevamento e raccolta:
- Quando gli amminoacidi eluiscono dalla colonna, vengono rilevati utilizzando un rilevatore, ad esempio un rilevatore ultravioletto-visibile (UV-Vis).
- Gli amminoacidi possono quindi essere raccolti come frazioni separate.
7. Frazionamento e analisi:
- Le frazioni raccolte vengono quindi ulteriormente analizzate e caratterizzate utilizzando tecniche come la cromatografia su strato sottile (TLC) o l'elettroforesi per confermare l'identità degli amminoacidi separati.
La cromatografia a scambio ionico è ampiamente utilizzata per separare e purificare amminoacidi, proteine e altre molecole cariche. Fornisce un controllo preciso sulla separazione dei composti in base alle loro specifiche proprietà di carica.
