1. Lisi cellulare:
- Raccogli i tuoi materiali che includono un campione di cellule (tessuto vegetale o animale), sale, sapone liquido per piatti e un tampone di estrazione del DNA (tampone TE o tampone Tris-EDTA).
- Mettere un piccolo pezzo del campione di tessuto in un mortaio e un pestello o in un piccolo contenitore con coperchio.
- Aggiungere una piccola quantità di sale al campione (circa 1/4 di cucchiaino per 1 grammo di tessuto).
- Aggiungere qualche goccia di detersivo liquido per piatti alla miscela e macinare o schiacciare accuratamente il tessuto.
- Questo passaggio rompe le membrane cellulari, rilasciando il DNA.
2. Precipitazione delle proteine:
- Trasferire il lisato (la miscela di cellule rotte) in una provetta da centrifuga.
- Aggiungere un volume di tampone di estrazione del DNA freddo pari al volume del lisato. Mescolare accuratamente.
- Il tampone di estrazione del DNA contiene detergenti che aiutano a dissolvere le membrane cellulari e le proteine, nonché una soluzione salina che aiuta a far precipitare le proteine (compresi gli istoni associati al DNA) dalla soluzione.
- Le proteine formano un ammasso e si separano dal DNA.
3. Precipitazione del DNA:
- Centrifugare la miscela per alcuni minuti ad alta velocità (circa 12.000–15.000 giri/min).
- Ciò farà sì che le proteine precipitate e i detriti cellulari formino un pellet sul fondo della provetta, lasciando il DNA nel surnatante (il liquido sopra il pellet).
4. Raccolta del DNA:
- Rimuovere con attenzione il surnatante, che contiene il DNA, in una nuova provetta.
- Evitare di trasferire il pellet, poiché contiene principalmente proteine e detriti cellulari.
- Il DNA è ora in una forma relativamente pura, priva della maggior parte dei componenti cellulari e delle proteine.
Estrazione con etanolo:
1. Precipitazione del DNA:
- Nella provetta contenente la soluzione di DNA derivante dall'estrazione con sapone salino, aggiungere un volume uguale di etanolo freddo al 95%-100%.
- Mescolare delicatamente capovolgendo più volte la provetta. Non vortexare, poiché ciò potrebbe tagliare il DNA.
- Il DNA inizierà a precipitare fuori dalla soluzione sotto forma di una massa bianca e filamentosa.
2. Lavaggio del DNA:
- Centrifugare la miscela per alcuni minuti ad alta velocità (circa 12.000–15.000 giri/min).
- Il DNA formerà un pellet sul fondo della provetta. rimuovere con attenzione il surnatante (la soluzione di etanolo) senza disturbare il pellet.
3. Essiccazione del DNA:
- Sciacquare delicatamente il pellet di DNA con etanolo freddo al 70% per rimuovere eventuali sali residui.
- Centrifugare brevemente per raccogliere il DNA sul fondo della provetta.
- Rimuovere con attenzione l'etanolo senza disturbare il pellet.
- Lasciare asciugare il pellet di DNA all'aria per alcuni minuti.
4. Risospensione del DNA:
- Aggiungere una piccola quantità di tampone di estrazione del DNA (tampone TE o tampone Tris-EDTA) alla provetta contenente il pellet di DNA.
- Utilizzare una micropipetta per risospendere delicatamente il DNA pipettando su e giù fino alla completa dissoluzione.
- Il DNA è ora pronto per ulteriori analisi, come PCR, elettroforesi su gel o altre tecniche di biologia molecolare.
Entrambi i metodi mirano a distruggere la membrana cellulare, a rilasciare il DNA e quindi a separare il DNA dagli altri componenti cellulari attraverso la precipitazione e la centrifugazione. Forniscono un modo semplice ed economico per estrarre il DNA per esperimenti di base e scopi didattici.
