L'isolamento dei batteri dal suolo è un primo passo importante in molti esperimenti di microbiologia. Una volta isolati, i batteri possono essere ulteriormente analizzati per determinare le cose, come le loro specie e la loro funzione nell'ambiente del suolo. Anche una piccola quantità di terreno può contenere milioni di batteri, il che rende necessario diluire un campione di suolo prima di isolare i batteri dal campione.
Misurare 100 ml. acqua distillata nel cilindro graduato e aggiungerla alla bottiglia sterile.
Pesare 1 g del campione di terreno e aggiungerlo alla bottiglia di acqua distillata. Tappare delicatamente la bottiglia e agitarla per miscelare accuratamente la soluzione.
Etichettare le provette sterili "10 ^ -3," "10 ^ -4," "10 ^ -5," e "10 ^ - 6." Aggiungere 9 ml di acqua distillata a ciascuna delle provette, utilizzando una delle pipette.
Trasferire 1 ml della soluzione nella bottiglia nella provetta contrassegnata con "10 ^ -3", utilizzando una nuova pipetta. Tappare il tubo e agitare delicatamente fino a quando la soluzione è ben miscelata.
Trasferire 1 ml della soluzione nella provetta "10 ^ -3" nella provetta "10 ^ -4" con una nuova pipetta. Tappare il tubo "10 ^ -4" e agitare per mescolare. Ripetere questo metodo per trasferire la soluzione dal tubo "10 ^ -4" al tubo "10 ^ -5" e quindi dal tubo "10 ^ -5" al tubo "10 ^ -6".
Piastra tre campioni ciascuno dai tubi "10 ^ -4", "10 ^ -5" e "10 ^ -6". Utilizzare una nuova pipetta per trasferire 1 ml di soluzione dal tubo in una piastra di Petri. Aggiungere circa 15 ml di agar nutriente alla piastra; poi metti il coperchio sulla piastra e agita delicatamente in modo che l'agar copra il fondo della piastra.
Crea una piastra di controllo mettendo 1 ml di acqua distillata in una piastra di Petri, usando una nuova pipetta. Aggiungi agar; mettere il coperchio e girare la piastra.
Lasciare le piastre di Petri in posizione verticale fino a quando l'agar non si è impostato. Quindi invertire le piastre e incubarle - in un incubatore oa temperatura ambiente - per un minimo di 24 ore e fino a cinque giorni.
Rimuovere le piastre dall'incubatrice dopo la quantità desiderata di tempo di incubazione. Contare le colonie batteriche su piastre contenenti da circa 30 a 300 colonie. Usa un pennarello indelebile per marcare le colonie che hai già contato per evitare di contare due volte le stesse colonie.
Dividi il numero di colonie contate dalla diluizione- "10 ^ -4," "10 ^ -5 "o" 10 ^ -6 "- della soluzione del terreno per ogni piastra. Trova il numero di batteri coltivabili nel grammo originale del suolo calcolando la media dei risultati di ciascuna piastra numerabile.
TL; DR (Troppo lungo, non letto)
Segui le tecniche di laboratorio asettiche in tutto la procedura.
Avviso
Per prevenire la contaminazione e possibili infezioni da batteri, assicurarsi di smaltire correttamente tutte le piastre di Petri, le soluzioni del terreno e le pipette.
Solo questa procedura misura i batteri coltivabili. Secondo la Cornell University, tra il 90 e il 99 per cento dei batteri del suolo non crescerà su agar nutriente.
