I chimici usano la cromatografia liquida ad alte prestazioni, o HPLC, per separare le miscele di composti. In generale, il metodo consiste nell'iniettare un campione in una colonna dove si mescola con uno o più solventi. Composti diversi si adsorbono, o "attaccano", alla colonna in gradi diversi; e mentre il solvente spinge i composti attraverso la colonna, uno dei componenti della miscela uscirà prima dalla colonna. Lo strumento rileva i composti quando escono dalla colonna e produce un cromatogramma costituito da un grafico con tempo di ritenzione sull'asse x e intensità del segnale dal rilevatore sull'asse y. Quando i composti escono dalla colonna, producono "picchi" nel cromatogramma. In generale, più distanti e più stretti i picchi nel cromatogramma, maggiore è la risoluzione. Gli scienziati considerano una risoluzione di 1.0 o superiore per rappresentare una separazione adeguata.

Misurare le larghezze di due picchi adiacenti nel cromatogramma osservando dove i valori dell'asse x si trovano alla base di ciascun picco. L'asse x rappresenta il tempo di ritenzione, solitamente misurato in secondi. Quindi, se un picco inizia a 15,1 secondi e termina a 18,5 secondi, la sua larghezza è (18,5 - 15,1) = 3,4 secondi.

Determina i tempi di ritenzione osservando il tempo, cioè la posizione sulla x- asse, che corrisponde alla posizione dei massimi dei picchi. Questo valore sarà normalmente circa a metà strada tra i due valori utilizzati per calcolare la larghezza nel passaggio 1. L'esempio indicato nel passaggio 1, ad esempio, mostrerebbe un massimo a circa 16,8 secondi.

Calcola la risoluzione, R , tra due picchi di

R = (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],

dove RT1 e RT2 rappresentano i tempi di ritenzione dei picchi 1 e 2, e W1 e W2 rappresentano le larghezze dei picchi presi alle loro basi. Continuando l'esempio dei passaggi 2 e 3, un picco mostra un tempo di ritenzione di 16,8 secondi e una larghezza di 3,4 secondi. Se il secondo picco mostrava un tempo di ritenzione di 21,4 secondi con una larghezza di 3,6 secondi, la risoluzione sarebbe

R = (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] = 4,6 /3,5 = 1.3.