I chimici usano la cromatografia liquida ad alte prestazioni, o HPLC, per separare le miscele di composti. In generale, il metodo consiste nell'iniettare un campione in una colonna in cui si mescola con uno o più solventi. Diversi composti si assorbono, o "si attaccano", alla colonna in diversi gradi; e quando il solvente spinge i composti attraverso la colonna, uno dei componenti della miscela uscirà prima dalla colonna. Lo strumento rileva i composti quando escono dalla colonna e produce un cromatogramma costituito da un diagramma con tempo di ritenzione sull'asse xe intensità del segnale dal rivelatore sull'asse y. Quando i composti escono dalla colonna, producono "picchi" nel cromatogramma. In generale, più sono distanti e più stretti sono i picchi nel cromatogramma, maggiore è la risoluzione. Gli scienziati ritengono che una risoluzione di 1,0 o superiore rappresenti una separazione adeguata.

Misura la larghezza di due picchi adiacenti nel cromatogramma osservando dove i valori dell'asse x sono alla base di ciascun picco. L'asse x rappresenta il tempo di ritenzione, generalmente misurato in secondi. Pertanto, se un picco inizia a 15,1 secondi e termina a 18,5 secondi, la sua larghezza è (18,5 - 15,1) \u003d 3,4 secondi.


Determina i tempi di ritenzione annotando il tempo, ovvero la posizione sulla x- asse, che corrisponde alle posizioni dei massimi dei picchi. Questo valore sarà normalmente circa a metà strada tra i due valori utilizzati per calcolare la larghezza nel passaggio 1. L'esempio fornito nel passaggio 1, ad esempio, mostrerebbe un massimo a circa 16,8 secondi.


Calcola la risoluzione, R , tra due picchi di


R \u003d (RT1 - RT2) /[0,5 * (W1 + W2)],


dove RT1 e RT2 rappresentano i tempi di ritenzione dei picchi 1 e 2, e W1 e W2 rappresentano le larghezze dei picchi rilevati alle loro basi. Continuando l'esempio dai passaggi 2 e 3, un picco mostra un tempo di ritenzione di 16,8 secondi e una larghezza di 3,4 secondi. Se il secondo picco mostrasse un tempo di ritenzione di 21,4 secondi con una larghezza di 3,6 secondi, la risoluzione sarebbe


R \u003d (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] \u003d 4,6 /3,5 \u003d 1.3.