• Home
  • Chimica
  • Astronomia
  • Energia
  • Natura
  • Biologia
  • Fisica
  • Elettronica
  •  science >> Scienza >  >> Biologia
    Qual è la funzione di un tampone Tris nell'estrazione del DNA?

    Tris, o tris (idrossimetil) aminometano, è un tampone biologico comune, utilizzato durante il processo di estrazione del DNA. Durante l'estrazione da qualsiasi numero di fonti, il DNA è sensibile al pH. Durante la lisi cellulare, la rimozione di componenti cellulari indesiderati e la precipitazione, il tris viene utilizzato per mantenere un pH stabile. Inoltre, svolge un ruolo particolarmente importante nella lisi cellulare.

    TL; DR (troppo lungo; non letto)

    L'estrazione del DNA è un processo sensibile al pH e utilizza un tampone tris aiuta a mantenere il pH stabile rispetto alla lisi e all'estrazione delle cellule.
    Tris come tampone

    Poiché il pH può influenzare ed essere influenzato da una serie di fattori cellulari, mantenere un pH stabile è essenziale per la scienza sperimentale. I tamponi biologici, come il tris, sono importanti perché possono mantenere un pH stabile nonostante influenze che potrebbero altrimenti spostare il pH. Il tris (idrossimetil) aminometano, con una pKa di 8,1, è un tampone efficace tra pH 7 e 9. A causa della sua gamma neutra, il tris è un tampone comunemente usato nei laboratori biologici. Tuttavia, il tampone tris è sensibile alla temperatura e dovrebbe essere usato alla temperatura alla quale è stato originariamente sottoposto a pH per evitare imprecisioni.
    Lisi delle cellule

    La lisi, o rottura delle cellule, è il primo passo del DNA estrazione. Ciò viene realizzato da un tampone contenente tris ed EDTA (acido etilendiamminotetraacetico). L'EDTA lega cationi bivalenti come calcio e magnesio. Poiché questi ioni aiutano a mantenere l'integrità della membrana cellulare, eliminandoli con EDTA si destabilizzano la membrana. Tris è il principale componente di buffering; il suo ruolo principale è quello di mantenere il pH del buffer in un punto stabile, di solito 8,0. Inoltre, il tris probabilmente interagisce con l'LPS (lipopolisaccaride) nella membrana, servendo a destabilizzare ulteriormente la membrana.
    Tris protegge il DNA dagli spostamenti di pH

    Quando le cellule vengono scomposte, il loro DNA e il loro contenuto si rovesciano nel buffer. Inoltre, RNase A (distrugge l'RNA), proteasi (distrugge le proteine) e SDS (sodio dodecil solfato, solubilizza i frammenti di membrana) sono spesso inclusi. Nel loro insieme, questa zuppa di contenuto cellulare e RNA frammentato e proteine può avere un grande impatto sul pH della soluzione. Poiché il DNA è sensibile al pH, è importante che il tris tamponi la zuppa e mantenga il pH stabile.
    Precipitazione del DNA

    Nella fase finale dell'estrazione del DNA, il DNA stesso viene estratto dal soluzione. A questo punto, il DNA è solubile nel buffer. Per estrarre dalla soluzione, il DNA viene reso insolubile aggiungendo etanolo o isopropanolo (alcool isopropilico). Fatto ciò, il DNA diventa ovvio in soluzione come una sostanza bianca già. Sebbene il DNA possa essere isolato dai restanti componenti cellulari in questo modo, non è "utilizzabile" quando è insolubile. Dopo l'isolamento, l'alcool viene rimosso e il DNA deve essere restituito a un tampone biologico, come il tris, per essere utilizzato.
    Fai da te

    Sebbene l'estrazione del DNA sia comunemente eseguita nei laboratori di ricerca, generalmente usando uno di una serie di kit disponibili in commercio, chiunque può eseguire l'estrazione del DNA a casa utilizzando oggetti domestici comuni e piselli o spinaci. In questo caso, tris, né alcun tampone biologico, non è presente per proteggere il DNA da variazioni di pH. Tuttavia, è un modo visivo di aiutare gli studenti a connettersi con il DNA cellulare.

    © Scienza http://it.scienceaq.com