Ecco il guasto:
1. Illuminazione:
* Luce bianca è la fonte di illuminazione primaria nella maggior parte dei microscopi ottici, compresi i microscopi a fluorescenza. Illumina il campione che viene visualizzato.
2. Fluorescenza:
* In microscopia a fluorescenza , i coloranti specifici (chiamati fluorofori) vengono utilizzati per etichettare il campione. Questi coloranti emettono luce di un colore specifico quando eccitati dalla luce di un colore diverso.
* Blue Light viene spesso usato per eccitare proteine fluorescenti verdi (GFP) , che sono comunemente usati come marcatori genetici.
* Luce rossa viene spesso usato per eccitare proteine fluorescenti rosse (RFP) o altri coloranti che emettono fluorescenza rossa.
3. Filtri:
* Il microscopio utilizza filtri per separare la luce di eccitazione dalla fluorescenza emessa.
* Filtro di eccitazione: Questo filtro consente solo la lunghezza d'onda specifica della luce che eccita il fluoroforo da passare.
* Filtro di emissione: Questo filtro consente solo la lunghezza d'onda specifica della luce emessa dal fluoroforo per raggiungere l'osservatore.
Ecco come funziona:
1. Eccitazione: La luce blu è diretta sul campione, eccitando le molecole GFP all'interno del campione.
2. Emissione: Le molecole GFP eccitate emettono una luce verde.
3. Filtro: La luce di eccitazione rossa è bloccata da un filtro di emissione, consentendo solo alla fluorescenza verde di raggiungere l'occhio dell'osservatore o la fotocamera.
Perché usare il blu e il rosso?
* Colori distinti: La luce blu e rossa viene scelta per le loro distinte lunghezze d'onda, permettendo loro di eccitare e rilevare diversi fluorofori. Ciò consente la visualizzazione di più target all'interno di un singolo campione.
* Separazione spettrale: La luce blu e rossa è relativamente lontana dallo spettro elettromagnetico, rendendo più facile filtrare le lunghezze d'onda indesiderate e isolare la fluorescenza specifica.
In sintesi:
* La luce blu e rossa viene utilizzata nella microscopia a fluorescenza per eccitare diversi fluorofori, ma non come la fonte di illuminazione primaria.
* I filtri sono essenziali per separare la luce di eccitazione dalla fluorescenza emessa, consentendo la visualizzazione di target specifici all'interno di un campione.
