Uno dei modi classici per determinare la concentrazione di microbi in un campione è quello di diluire il campione, far crescere i microbi sulle piastre e contare le colonie. I microbi placcati crescono da un'unità di formazione di colonie costituita da una o più cellule in una colonia visibile che può essere vista e contata. I batteri sono il microbo più comune da valutare usando il conteggio delle piastre. I conteggi delle colonie sono utilizzati per rilevare e contare i microbi nel suolo, nell'acqua e nel cibo. I protocolli per il conteggio delle colonie enfatizzano un approccio accurato e metodico.
Diluendo campioni, placcatura e incubazione
Se spalma semplicemente un campione di microbo su una piastra di agar, vedrai così tante formazioni di colonie unità che le singole colonie si fondono insieme, rendendole impossibili da contare. Per risolvere questo problema, mescolare il campione in un mezzo liquido, prendere una piccola quantità di quella miscela e diluirla ulteriormente. Ripeti questo processo da sei a 10 volte. Distribuisci la diluizione finale su una piastra di agar e incubala per quattro o sette giorni prima di contare le colonie.
Conteggio manuale
Il trucco principale nel contare le colonie è contare ogni punto di una colonia una volta. Un approccio è quello di impostare la piastra di Petri su uno sfondo di griglia e contare le colonie in ogni cella della griglia, muovendosi in un modello metodico attraverso tutte le celle. Anche la marcatura delle colonie contate sul retro della piastra di Petri può essere un approccio utile. Generalmente, dovrai contare almeno tre piatti; utilizzare solo piatti contenenti da 30 a 300 colonie per fare inferenze robuste, suggerisce la rete di microbiologia, una società che fornisce servizi di consulenza a laboratori e produttori. Piastre con colonie troppo numerose per contare o con troppo poche colonie devono essere riposizionate da una nuova diluizione.
Conteggio automatico
L'errore umano si aggiunge al tempo impiegato nel conteggio delle colonie manualmente . Per migliorare sia la precisione che l'efficienza, posizionare la capsula di Petri in un dispositivo di conteggio delle colonie automatizzato. I contatori automatici di colonie prendono un'immagine del piatto, separano le colonie dallo sfondo e poi usano un algoritmo per contare le colonie sul piatto. Gli algoritmi possono avere difficoltà a differenziare le colonie quando due o più colonie si toccano ai bordi, quindi questa è un'area di sviluppo software in corso.
Rendere il conteggio più complicato
L'accuratezza del calcolo della densità dei microbi dai conteggi delle colonie ha alcune limitazioni. Le unità che formano colonie possono essere una singola cellula, una catena di cellule o un intero gruppo di cellule. L'ipotesi è che una colonia rappresenti una cellula, quindi le concentrazioni calcolate dai conteggi delle colonie possono essere basse. Microbi diversi necessitano di condizioni di crescita diverse e le colonie sulla piastra rappresentano solo quei microbi che prosperano su quel mezzo di crescita in quelle condizioni di incubazione. Inoltre, il conteggio delle colonie non registra le cellule morte, una considerazione importante quando è necessaria la concentrazione di cellule nel campione originale.
