1. Sistema di elettroforesi:
* gel: I tipi più comuni sono l'agarosio e la poliacrilammide. I gel di agarosio sono usati per molecole più grandi, mentre i gel di poliacrilammide sono usati per molecole più piccole.
* Buffer: Una soluzione elettrolitica che conduce elettricità e mantiene il pH del gel.
* Alimentazione: Fornisce la corrente elettrica che guida la migrazione delle molecole.
* Comb: Crea pozzi nel gel in cui vengono caricati i campioni.
2. Preparazione del campione:
* Esempio: Questo può essere DNA, RNA, proteine o altre molecole che si desidera separare.
* Caricamento della tintura: Contiene una tintura di monitoraggio che consente di monitorare l'avanzamento dell'elettroforesi e una soluzione densa per aiutare il campione ad affondare nel pozzo.
3. Rilevamento e analisi:
* colorazione: Utilizzato per visualizzare le molecole separate. Le macchie comuni includono:
* bromuro di etidio (ETBR) per DNA e RNA (fluorescenti sotto luce UV)
* Coomassie Blue per proteine
* Sistema di imaging: Un sistema in grado di acquisire e analizzare il gel colorato, come un transilluminatori UV, un sistema di documentazione del gel o uno scanner.
* Software: Per l'analisi dei risultati, misurare le dimensioni della banda e il calcolo dei pesi molecolari.
4. Altre attrezzature:
* Pipette: Utilizzato per caricare accuratamente campioni nei pozzi di gel.
* Micropipette: Una piccola pipetta che misura volumi molto piccoli di liquido.
* Guanti: Per proteggere le mani da sostanze chimiche e macchie.
Misurazioni chiave in elettroforesi:
* Distanza di migrazione: La distanza percorsa da una molecola dal pozzo alla sua posizione finale sul gel.
* Mobilità: Una misura della velocità con cui una molecola si muove in un campo elettrico.
* Peso molecolare: La dimensione della molecola, che può essere stimata in base alla sua distanza di migrazione rispetto agli standard noti.
* Concentrazione: La quantità di una molecola presente in un campione, che può essere misurata dall'intensità della banda macchiata.
Utilizzando questa attrezzatura e seguendo protocolli stabiliti, gli scienziati possono effettivamente separare e analizzare biomolecole usando l'elettroforesi.
