Storicamente , il cloroformio è stato usato come parte di un'estrazione fenolo-cloroformio metodo. Ecco come ha funzionato:
* Lisi cellulare: Il primo passo ha comportato la rottura delle cellule per rilasciare il DNA.
* Phenolo: Il fenolo è stato quindi aggiunto alla miscela. Il fenolo è una forte denaturante che separa le proteine dal DNA.
* cloroformio: Il cloroformio è stato aggiunto per creare un sistema bifasico , significa che si formavano due strati. Lo strato superiore conteneva la soluzione acquosa con il DNA, mentre lo strato inferiore conteneva il fenolo e le proteine denaturate.
Perché il cloroformio non viene più usato:
* Sicurezza: Il cloroformio è un composto tossico e cancerogeno, presenta un rischio significativo per i ricercatori.
* Efficienza: I metodi moderni come le colonne di spin o l'estrazione a base di perline magnetiche sono molto più veloci, più facili e più sicuri dei metodi di fenolo-cloroformio. Queste tecniche si basano su diversi principi per isolare il DNA.
Invece del cloroformio, moderni usi di estrazione del DNA:
* Buffer: I tamponi vengono utilizzati per creare la giusta concentrazione di pH e sale per lisse le cellule e separare il DNA da altri componenti cellulari.
* enzimi: Gli enzimi come la proteinasi K sono usati per digerire le proteine, separando ulteriormente il DNA da altri componenti cellulari.
* colonne di giri o perle magnetiche: Questi materiali si legano al DNA, consentendo il suo isolamento e purificazione dal resto del campione.
In sintesi, mentre una volta il cloroformio veniva utilizzato nell'estrazione del DNA, non è più considerato un metodo sicuro o efficiente. Le moderne tecniche di estrazione del DNA utilizzano metodi alternativi per ottenere gli stessi risultati con maggiore sicurezza e facilità.
