Ecco perché:
* precipitazione dell'RNA: L'etanolo aiuta a precipitare l'RNA dalla soluzione. L'RNA è molto solubile in acqua, ma quando viene aggiunto l'etanolo, riduce la solubilità dell'RNA, facendolo uscire dalla soluzione come precipitato solido.
* Lavare via le impurità: Durante la fase di lavaggio, l'etanolo aiuta a rimuovere contaminanti come sali, proteine e altri detriti cellulari che possono essere presenti nel campione di RNA.
Come funziona:
1. Disidratazione: L'etanolo è un agente disidratante, il che significa che rimuove l'acqua dalla soluzione. Questa riduzione del contenuto d'acqua riduce la solubilità dell'RNA, portando a precipitazioni.
2. Effetto salino: Nella maggior parte dei protocolli di estrazione dell'RNA, prima viene aggiunta una soluzione salina come l'acetato di sodio. Questo sale aiuta a neutralizzare la carica negativa della molecola di RNA, rendendolo meno solubile in acqua e più probabilità di precipitare.
3. Selettività: Mentre l'etanolo precipita l'RNA, non fa precipitare il DNA in modo efficiente. Questo aiuta a garantire che il campione di RNA finale sia relativamente privo di contaminazione del DNA.
Considerazioni importanti:
* Concentrazione di etanolo: La concentrazione di etanolo utilizzato nell'estrazione dell'RNA è cruciale. Una concentrazione troppo bassa potrebbe non essere efficace nella precipitazione dell'RNA, mentre una concentrazione troppo elevata può portare alla precipitazione di altri componenti indesiderati. Il 75% di etanolo è comunemente usato perché fornisce un equilibrio ottimale per le precipitazioni e il lavaggio.
* Temperatura: La precipitazione dell'etanolo viene generalmente eseguita a basse temperature, spesso su ghiaccio o a 4 ° C, per ridurre al minimo la degradazione dell'RNA.
Complessivamente, il 75% di etanolo svolge un ruolo critico nell'estrazione dell'RNA precipitando l'RNA dalla soluzione e lavando via i contaminanti, garantendo l'isolamento dell'RNA puro e intatto.
