Tuttavia, è importante notare che:
* Alcuni lieviti possono colorare i grammi positivi a causa delle variazioni nella struttura della parete cellulare.
* Il risultato della macchia di Gram può essere influenzato da fattori come l'età e le condizioni di crescita della cultura del lievito.
Pertanto, mentre il lievito è generalmente considerato gram-negativo, non è un metodo infallibile per l'identificazione e potrebbero essere necessari ulteriori test per l'identificazione conclusiva.