Gli inibitori della proteasi sono enzimi che inibiscono le azioni delle proteasi, che sono determinati enzimi che uccidono le proteine all'interno delle cellule. Esistono diverse proteasi che prendono di mira diverse proteine. Pertanto, per preservare la funzionalità delle proteine dopo la lisi cellulare, viene utilizzata una combinazione o un cocktail di inibitori della proteasi. Questi sono disponibili sotto forma di soluzione, compressa o in polvere.
Inibitori della proteasi
Preparare Aprotinina, Leupeptina e Pepstatina a concentrazioni di stock di 100 μM (MicroMolar).
L'aprotinina è disponibile in forma della soluzione a una concentrazione di 100 mM. Per ottenere 1 ml (millilitri) di 100 μM, sciogliere 1 μl (microlitro) in 999ul di PBS 1 (soluzione tampone fisiologica).
Leupeptina è disponibile in polvere. Il peso molecolare di Leupeptin è 475.6. Sciogliere 100ug (microgrammi) di polvere in 2 ml di acqua per ottenere una concentrazione di 100 μm.
Per preparare Pepstatin, sciogliere 100ug di polvere di pepstatina in 1,45 ml di acqua per ottenere una concentrazione di 100 μm.
Tutti questi possono essere miscelati insieme o conservati singolarmente a meno 80 gradi Celsius.
Produrre PMSF (fenilmetilsilfluoruro di fluoruro) a stock 100mM. PMSF arriva sotto forma di polvere. Il peso molecolare di PMSF è 174,19. Sciogliere 10 mg di PMSF in 572 ul di etanolo al 100% e conservare a 4 gradi Celsius. È sensibile alla luce e deve essere conservato al buio.
Questo viene aggiunto al buffer di lisi appena prima dell'uso.
Miscelare le proteasi insieme alle concentrazioni richieste. Generalmente sono diluiti per un fattore di 100.
Suggerimento
I cocktail disponibili in commercio di inibitori della proteasi risparmiano tempo e sono facili da usare. Vengono sotto forma di compresse o soluzioni.
