Gli enzimi possiedono una struttura tridimensionale definita. Qualsiasi cambiamento in questa struttura provoca un cambiamento nell'attività dell'enzima. Il pH della miscela di reazione modifica questa struttura e quindi l'attività. Ogni enzima ha un pH ottimale dove mostra la massima attività. Differenze significative da questo pH causano cambiamenti nella struttura tridimensionale dell'enzima che riducono la sua attività. L'enzima catecolossidasi ha un pH ottimale di circa 7.

Informazioni su Catecol Oxidase

Il catecolo viene ossidato dalla catecol ossidasi in presenza di ossigeno per formare il benzoquinone che, esposto all'aria, forma la melanina . Questo enzima è noto anche con altri nomi, come la tirosinasi, il difenol ossidasi e il polifenolo ossidasi. Patate, mele e banane contengono catecolo ossidasi che agisce sul catecolo incolore e lo converte in melanina di colore marrone. La doratura che si verifica quando si taglia e si espongono questi oggetti all'aria è il risultato di questa reazione.

Estrazione di catecol ossidasi

La catecol ossidasi può essere estratta dalle banane o dalle patate. Mescolare una banana con il doppio del volume di acqua in un mortaio e un pestello. In alternativa, mescolare una banana con acqua per ottenere l'estratto di catecolo ossidasi. Filtrare attraverso la mussola di burro e conservare in frigorifero. Se si usano le patate, sbucciarle e tagliarle a pezzi, quindi frullare ad alta velocità usando 700 ml di acqua fredda distillata. Filtrare questo succo di patate con la garza e conservare in frigorifero.

Dettagli sperimentali

Preparare soluzioni tampone con i valori di pH 2, 4, 6, 7 e 8. Etichettare cinque provette con questi valori di pH. Riempire ciascun tubo fino a un quarto della capacità con il rispettivo buffer. Aggiungere 10 gocce di estratto di catecolo ossidasi in ciascuna di queste provette, seguite da 10 gocce di catecolo. Agitare i tubi e annotare il colore di ciascun tubo su una scala da 0 a 5, dove 0 indica nessun colore e 5 indica un colore scuro e marrone. Continua a scuotere le valvole e annota il colore ogni cinque minuti per i prossimi 20 minuti.

Interpretazione dei risultati

Utilizza i dati ottenuti per la lettura di 20 minuti per tracciare un grafico. Sull'asse X, indicare il pH dei buffer. Sull'asse Y, indicare le intensità del colore da 0 a 5. Per ogni valore di pH, contrassegnare l'intensità del colore e unire questi segni per ottenere il grafico finale. Individuare il picco di questo grafico e identificare il pH ottimale per la reazione della catecolo ossidasi. Se l'esperimento è stato eseguito correttamente, il valore pH ottimale sarà 7. A pH 7, l'enzima è più attivo e catalizza rapidamente l'ossidazione del catecolo per dare il colore scuro e marrone.

Precauzioni

Le banane e le patate contengono catecolo. Pertanto, c'è la possibilità che parte di questo si ossidi durante la reazione, contribuendo all'intensità del colore che osservi. Per prevenire questa reazione, mantenere l'estratto di catecolo ossidasi su un blocco di ghiaccio prima di aggiungerlo in ogni provetta. Catecolo è velenoso, quindi assicurati di non permettere che venga a contatto con la tua pelle. Non pipettare soluzioni di catecolo e in caso di versamento, indossare i guanti per pulirlo con salviette di carta.