Enterobacter aerogenes e altre specie di Enterobacteriaceae sono facili da identificare usando il kit di test API-20E. Questo kit, prodotto da bioMeriuex Inc., include 20 mini-tubi o pozzetti per il test. Il test consiste nell'inoculare una sospensione batterica pura nei pozzetti di test e nella lettura delle reazioni cromatiche che si verificano. L'identificazione si basa sulla conversione dei risultati di queste reazioni cromatiche in un codice a sette cifre noto come l'indice analitico del profilo. La corrispondenza di questo codice con il database del produttore fornisce un'identificazione dell'organismo.
Isolare l'organismo che si desidera identificare su un terreno di coltura specifico per Enterobacteriaceae. Utilizzare il kit di test API 20E solo con colture pure e non direttamente su campioni di colture miste.
Aprire una fiala contenente 5 ml di cloruro di sodio allo 0,85% medio. Rimuovere una singola colonia da una piastra isolante da 18 a 24 ore con una pipetta e aggiungerla nella fiala. Mescolare per ottenere una sospensione omogenea. Usa questa sospensione non appena finisci di prepararla.
Prepara una scatola di incubazione composta da pozzetti a nido d'ape in un vassoio dotato di coperchio. Aprire la scatola e aggiungere 5 ml di acqua demineralizzata o distillata nei pozzetti del vassoio. Disimballare la striscia fornita nel kit di test API 20E e inserirla nella scatola di incubazione.
Riempire il tubo e la tazza dei pozzetti contrassegnati con "GEL", "VP" e "CIT" con la sospensione ho preparato. Nei restanti pozzetti, riempire la sospensione batterica nel tubo, ma non nella tazza. Aggiungere olio minerale nei pozzetti contrassegnati con "ADH", "ODC", "LDC", "URE" e "H2S" per creare un ambiente anaerobico.
Coprire la scatola di incubazione con il coperchio e incubare in un temperatura tra 34 e 38 gradi Celsius per 18 a 24 ore.
Osservare i pozzetti e annotare le reazioni sul foglio dei risultati. A condizione che almeno tre test siano positivi, procedere alle reazioni del colore utilizzando le soluzioni per test chimici o i reagenti forniti con il kit. Aggiungere una goccia di reagente TDA nel ben marcato "TDA" e una goccia ciascuno dei reagenti VP1 e VP2 in ben marcato "VP". Se meno di tre test sono risultati positivi, incubare le strisce per altre 24 ore prima di aggiungere questi reagenti.
Osservare le variazioni di colore prodotte nei pozzetti. Un colore marrone rossastro in TDA indica una reazione positiva. Attendere 10 minuti dopo aver aggiunto i reagenti dal kit a VP1 e VP2. Considerare un colore rosso o rosa come positivo e un colore rosa pallido che appare dopo 10 minuti come negativo.
Aggiungere una singola goccia di reagente JAMES dal kit di test al pozzetto contrassegnato con "IND". Considerare un colore rosato nell'intera tazza come reazione positiva.
Eseguire il test dell'ossidasi come specificato dal produttore del kit e registrare i risultati insieme ai risultati dei precedenti 20 test.
Utilizzare la tabella di lettura fornita con il kit di test per assegnare i valori per le reazioni osservate in ciascuno dei pozzetti del test. Aggiungi questi valori come prescritto per ottenere il numero di profilo a sette cifre.
Inserisci questo numero di profilo a sette cifre nel database del produttore del kit tramite un telefono a toni. Attendi per ricevere l'identificazione fornita dal database. Se il numero del profilo non fornisce risultati specifici, eseguire i test supplementari specificati dal produttore del kit.
