Per preparare *V* mL di un tampone fosfato con *C"M di NaH2PO4 e *D*M di Na2HPO4 che produce un pH 5,8, sarà necessario quanto segue:
$$ [H^+] =10^{−5,8} =1,58 × 10^{−6} M$$
Dove [H+] è la concentrazione desiderata di ioni idrogeno.
Possiamo usare l'equazione di Henderson-Hasselbalch per calcolare il rapporto tra NaH2PO4 e Na2HPO4 necessario per raggiungere questo pH:
$$pH =pKa + log \left ( \frac{[A^-]}{[HA]} \right )$$
Dove:
* *Ka* è la costante di dissociazione acida di H2PO4- (l'acido coniugato di NaH2PO4)
* [A-] è la concentrazione di Na2HPO4 (la base coniugata di NaH2PO4)
* [HA] è la concentrazione di NaH2PO4 (la forma acida)
Il *Ka* di H2PO4- a 25°C è *2,2 *10-7*. Pertanto, sostituendo i valori indicati nell'equazione di Henderson-Hasselbalch, otteniamo:
$$5.8 =7.2 + log \left ( \frac{[Na2HPO4]}{[NaH2PO4]} \right )$$
Risolvendo per [Na2HPO4] / [NaH2PO4], otteniamo:
$$\frac {[Na2HPO4]}{[NaH2PO4]} =0,398$$
Pertanto, il rapporto tra [NaH2PO4] e [Na2HPO4] dovrebbe essere 1:0,398 per ottenere un pH di 5,8.
Passaggio 2:preparare le soluzioni NaH2PO4 e Na2HPO4
- Pesare la quantità necessaria di NaH2PO4 (0,2 M) e Na2HPO4 (0,1 M) utilizzando una bilancia analitica.
- Sciogliere ciascun composto in acqua Milli-Q in contenitori separati.
- Portare il volume di ciascuna soluzione a 500 ml utilizzando acqua Milli-Q.
*Passaggio 3:mescolare le soluzioni NaH2PO4 e Na2HPO4
- Miscelare le due soluzioni nel rapporto appropriato (in questo caso, 1 volume della soluzione 0,2 M NaH2PO4 a 0,398 volume della soluzione 0,1 M Na2HPO4).
- Aggiungere acqua DI per portare il volume totale a 1 litro.
- Controllare il pH del tampone utilizzando un pHmetro. Se necessario, regolare il pH aggiungendo piccole quantità di soluzione 0,2 M NaH2PO4 o 0,1 M Na2HPO4.
