1. Idrolisi estere di colesterolo:
- colesterolo esterasi (CE) idrolizzano esteri di colesterolo in colesterolo libero e acidi grassi.
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Estere di colesterolo + h2o → colesterolo + acido grasso
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2. Ossidazione del colesterolo:
- colesterolo ossidasi (CHOD) ossida il colesterolo libero a cholest-4-en-3-one e perossido di idrogeno (H2O2).
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Colesterolo + O2 → CHOLEST-4-EN-3-ONE + H2O2
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3. Reazione perossidasi:
- perossidasi (pod) catalizza la reazione tra H2O2 e un substrato cromogenico, 4-aminofenazone (4-AP) , in presenza di un fenolo, in genere fenolo 4-aminoantipirina (pap) . Ciò si traduce nella formazione di un colorante chinoneimina colorato.
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H2O2 + 4-AP + Pap → Dye chinoneimine + H2O
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Punti chiave:
* Reazioni accoppiate: Le reazioni sono accoppiate, il che significa che il prodotto di una reazione funge da substrato per il prossimo. Ciò garantisce che la formazione del prodotto colorato sia direttamente proporzionale alla concentrazione iniziale del colesterolo.
* Misurazione spettrofotometrica: L'intensità del prodotto colorato viene misurata usando uno spettrofotometro a una lunghezza d'onda specifica. L'assorbanza è direttamente proporzionale alla concentrazione di colesterolo.
* Calibrazione: Il metodo richiede una curva di calibrazione usando gli standard di colesterolo noti per mettere in relazione le letture di assorbanza alle concentrazioni di colesterolo.
Vantaggi del metodo CHOD-PAP:
* alta sensibilità e precisione
* relativamente semplice e rapido
* ampiamente disponibile e standardizzato
Svantaggi del metodo CHOD-PAP:
* può essere influenzato dalla lipemia (alti livelli di trigliceridi) ed emolisi
* richiede reagenti e attrezzature specializzate
Nel complesso, il metodo CHOD-PAP è un metodo affidabile e accurato per misurare i livelli di colesterolo nel sangue. È ampiamente utilizzato nei laboratori clinici ed è considerato il gold standard per la determinazione del colesterolo.
