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  • Preparazione automatizzata di N-glicani marcati con fluorescenza sensibili alla MS con un robot di pipettaggio

    Mappa dei contorni che mostra il recupero totale sommato di N-glicani marcati da cetuximab su un intervallo di temperature per la denaturazione delle proteine ​​(da 60 °C a 90 °C) lungo l'asse X e la de-N-glicosilazione (da 40 °C a 60 °C) lungo l'asse Y. Credito:Corey Reed

    Un nuovo rapporto di ricerca originale disponibile prima della stampa su Tecnologia SLAS dimostra la semi-automazione di un kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) che utilizza un robot pipettatore per migliorare la produttività della ricerca nelle scienze biologiche. Questa piattaforma robotica utilizza pipette manuali standard e un braccio guidato otticamente per facilitare l'automazione delle procedure manuali, riducendo il tempo che i ricercatori trascorrono al banco di laboratorio, e imitando, il più vicino possibile, i risultati ottenuti utilizzando il protocollo RFMS GlycoWorks manuale.

    Il kit GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) è stato lanciato nel 2015 e semplifica il modo in cui i ricercatori sono in grado di rilasciare e contrassegnare i glicani N-linked. Il kit consente agli analisti di eseguire una preparazione del campione ad alto rendimento e garantisce profili di N-glicani precisi e ripetibili. Il tag RFMS è unico in quanto fornisce un'etichettatura rapida e la massima sensibilità per le analisi sia ottiche che spettrometriche di massa.

    Autori Corey Reed, Jennifer Fournier e Stephan Koza di Waters Corporation (Milford MA) e Nikolas Vamvoukas di Andrew Alliance semplificano ulteriormente questo protocollo di preparazione del campione attraverso l'automazione utilizzando una soluzione robotica disponibile in commercio di Andrew Alliance. Andrea, il robot pipettatore, presenta una piattaforma ideale per l'automazione di questo kit con la sua capacità di pipettare bassi volumi e adattarsi alla variabilità del volume con domino personalizzati costruiti appositamente per questa soluzione.

    Per riprodurre accuratamente i risultati del protocollo manuale, i passaggi sensibili alla temperatura vengono ri-ottimizzati per la piattaforma automatizzata e viene testata una gamma di temperature per ottenere la massima efficienza di rilascio di N-glicani. A seguito di piccoli aggiustamenti, il protocollo automatizzato risulta essere statisticamente comparabile al protocollo manuale in termini di recupero di N-glicani marcati con RFMS e delle risultanti aree di picco relative alla fluorescenza. Inoltre, una subroutine nella procedura semplifica il processo di normalizzazione della concentrazione del campione prima del protocollo RFMS, risparmiando agli utenti una notevole quantità di tempo.

    Alla fine, gli autori adottano un protocollo robusto e facile da usare ed espandono con successo i vantaggi per la ricerca nelle scienze della vita aumentando la produttività del laboratorio. Gli utenti possono ora passare senza problemi dal protocollo manuale alla soluzione automatizzata, alleviare gli utenti dal pipettaggio monotono e controllare le aree chiave del protocollo normalmente soggette a errori dell'utente.


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