L'elettroforesi su gel è uno dei principali metodi utilizzati nella biologia molecolare per l'analisi del DNA. Questo metodo comporta la migrazione di frammenti di DNA attraverso un gel, dove vengono separati sulla base della dimensione o della forma. Tuttavia, anche un metodo scientificamente valido come l'elettroforesi su gel non è immune agli errori.
L'elettroforesi su gel implica l'uso di un gel solitamente fatto di polimeri come l'agarosio. Il gel è immerso in una soluzione tampone che conduce un campo elettrico. Il campione di DNA di interesse viene prima frammentato usando enzimi di restrizione e viene quindi iniettato nel gel. Quando il campo elettrico viene attivato, i frammenti di DNA nel gel migrano verso l'elettrodo positivo. Se i frammenti di DNA sono di dimensioni diverse, i tempi di migrazione saranno diversi per ciascun frammento di dimensione. I frammenti vengono quindi visualizzati utilizzando un colorante o autoradiografia e sono visibili come bande nel gel.
Contaminazione del campione
La principale applicazione dell'elettroforesi è uno strumento per l'analisi del DNA in biologia molecolare, ma è anche usato in medicina legale come mezzo per identificare campioni da una scena del crimine. È importante ridurre al minimo le fonti di errori in questa tecnica per ottenere risultati accurati. Una fonte di errore è la contaminazione del campione di DNA. Se nel campione è presente DNA estraneo, il gel avrà più bande di quelle che si troveranno in un gel che contiene solo il campione purificato.
Problemi con il gel, la corrente e il tampone
la concentrazione del gel deve essere corretta per evitare errori. Se la concentrazione è troppo alta o troppo bassa, i frammenti migreranno troppo lentamente o troppo rapidamente. Ciò porterà ad errori nella risoluzione delle diverse bande. Durante la corsa di elettroforesi, è necessario prestare attenzione per garantire che la tensione sia costante. Qualsiasi fluttuazione della tensione provocherà la migrazione instabile di frammenti di DNA, portando a errori nella lettura delle bande. Anche la soluzione tampone deve essere della composizione corretta, in quanto un tampone con pH o concentrazione ionica errati cambierà la forma dei frammenti di DNA, cambiando anche i tempi di migrazione.
Visualizzazione corretta
Soprattutto, il gel deve essere visualizzato correttamente. Se la concentrazione del colorante o sonda radioattiva utilizzata per visualizzare i campioni è troppo alta, l'immagine risultante sarà molto confusa, in quanto verranno visualizzati anche frammenti residui. Se la concentrazione di gel è troppo bassa, non ci sarà visualizzazione. Quando i processi corretti sono stati seguiti durante tutte le fasi, l'elettroforesi su gel produrrà risultati accurati e utilizzabili con grande sicurezza. Come con tutte le procedure scientifiche, l'elettroforesi su gel può essere soggetta a errori, ma questi possono essere minimizzati con una preparazione e una manipolazione adeguate.
