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    Come misurare la temperatura ottimale per un enzima

    Un enzima è una proteina che catalizza (aumenta il tasso di) reazioni chimiche. La temperatura ottimale della maggior parte degli enzimi, o la temperatura alla quale gli enzimi migliorano al meglio le reazioni, è compresa tra 35 e 40 gradi Celsius. L'aumento della temperatura all'interno di questa finestra aumenta la velocità di reazione, poiché eccita le molecole e aumenta la velocità con cui gli enzimi /reagenti si scontrano e reagiscono per produrre il prodotto. Tuttavia, aumentare troppo la temperatura può indebolire l'enzima e impedirne il funzionamento.

    Determinare la temperatura ottimale dell'enzima riscaldando la reazione per quantità infinitesimali e prelevando piccoli campioni della reazione, per determinare quando la velocità massima di si verifica la produzione del prodotto.

    Seleziona un metodo. Determina come misurare la concentrazione del tuo prodotto in vari punti dell'esperimento. Ad esempio, puoi misurare la concentrazione di molti prodotti usando uno spettrofotometro e calcolare la concentrazione dall'assorbanza, o misurando la fluorescenza e calcolando la concentrazione dalla fluorescenza.

    Imposta il tuo esperimento. Metti i reagenti e l'enzima in un piccolo contenitore con un coperchio, come una fiala di scintillazione. La reazione inizierà. Collocare la fiala di scintillazione in un becher più grande di acqua a temperatura ambiente. Posizionare il becher su una piastra di riscaldamento. Posiziona un termometro all'interno del becher. Questo ti permette di misurare la temperatura della reazione in vari punti.

    Prendi un campione da 100 microlitri della reazione a temperatura ambiente, circa 25 gradi Celsius. Accendi la piastra di riscaldamento. A varie temperature tra 30 e 40 gradi Celsius (30,5, 31, 31,5, ecc.) Prendi 100 microlitri di campione della tua reazione.

    Determina la concentrazione del tuo prodotto ad ogni temperatura. Quando la temperatura supera i 40 gradi Celsius, vedrai una diminuzione della velocità con cui il substrato viene convertito in prodotto, poiché l'enzima viene denaturato. Il punto in cui il prodotto viene prodotto alla massima velocità è il punto in cui la temperatura è ottimale.

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