1. Analisi morfologica :Ciò comporta l'esame della linea cellulare al microscopio per osservarne la forma, le dimensioni e le caratteristiche di crescita. Sebbene l'analisi morfologica possa essere utile per identificare le caratteristiche generali di una linea cellulare, non è sempre sufficiente per l'autenticazione definitiva.
2. Immunofenotipizzazione :Questo metodo utilizza anticorpi per rilevare la presenza o l'assenza di specifici marcatori di superficie o proteine intracellulari caratteristiche di un particolare tipo di cellula. L'immunofenotipizzazione può essere eseguita utilizzando tecniche come la citometria a flusso o l'immunocitochimica.
3. Cariotipo :Questa tecnica prevede l'analisi del numero di cromosomi e della struttura di una linea cellulare. Il cariotipo può identificare anomalie o cambiamenti cromosomici che possono indicare contaminazione o identificazione errata.
4. Impronta digitale del DNA :questo metodo prevede l'analisi dei modelli di DNA unici di una linea cellulare utilizzando tecniche come il profilo STR (Short Tandem Repeat) o l'analisi del polimorfismo a singolo nucleotide (SNP). L'impronta digitale del DNA può fornire un elevato livello di discriminazione ed è ampiamente utilizzata per l'autenticazione della linea cellulare.
5. PCR specie-specifica :Questo metodo utilizza la reazione a catena della polimerasi (PCR) per amplificare sequenze di DNA specifiche che sono uniche per la specie di origine della linea cellulare. La PCR specie-specifica può essere utilizzata per rilevare la contaminazione incrociata o l'errata identificazione delle linee cellulari.
6. Analisi degli isoenzimi :Questa tecnica prevede l'analisi della mobilità elettroforetica degli isoenzimi, che sono varianti di enzimi che differiscono nella loro struttura molecolare e funzione. L'analisi degli isoenzimi può essere utilizzata per identificare la contaminazione della linea cellulare o un'identificazione errata basata sulle differenze nei modelli di isoenzimi.
7. Test del micoplasma :I micoplasmi sono un tipo di batteri che possono contaminare le colture cellulari e influenzarne il comportamento e i risultati sperimentali. Il test del micoplasma è essenziale per garantire che le linee cellulari siano esenti da contaminazione da micoplasma.
È importante notare che la scelta del metodo di autenticazione dipende dalla linea cellulare specifica e dal livello di autenticazione richiesto. Alcune linee cellulari potrebbero richiedere più metodi di autenticazione per garantire un'identificazione affidabile e un controllo di qualità. Inoltre, un'adeguata documentazione e tenuta dei registri del processo di autenticazione sono fondamentali per mantenere l'integrità delle linee cellulari e garantire la riproducibilità nella ricerca.
