Materiali:
1. Acqua deionizzata
2. Potassio fosfato monobasico (KH2PO4)
3. Sodio idrogeno fosfato (Na2HPO4)
4. pHmetro
5. Agitatore magnetico o ancoretta
6. Matraccio tarato (ad esempio, 1000 ml)
7. Cilindro graduato o pipetta
Reagenti:
1. Soluzione di fosfato monobasico di potassio (KH2PO4) 0,2 M:sciogliere 17,41 g di KH2PO4 in 1000 ml di acqua deionizzata.
2. Soluzione 0,2 M di sodio idrogeno fosfato (Na2HPO4):sciogliere 28,48 g di Na2HPO4 in 1000 mL di acqua deionizzata.
Procedura:
1. Calcolare i volumi delle soluzioni 0,2 M KH2PO4 e 0,2 M Na2HPO4 necessari per preparare 1000 mL di tampone fosfato 0,1 M a pH 7,5. Utilizza l'equazione di Henderson-Hasselbalch:
pH =pKa + log ([A-]/[HA])
Dove:
- Il pH è il pH desiderato (7,5)
- pKa è la costante di dissociazione dell'acido fosforico (7.21)
- [A-] è la concentrazione della base coniugata (Na2HPO4)
- [HA] è la concentrazione dell'acido debole (KH2PO4)
Riorganizzando l'equazione e sostituendo i valori:
log ([A-]/[HA]) =pH - pKa =7,5 - 7,21 =0,29
[A-]/[HA] =antilog (0,29) =1,959
Dalla concentrazione del tampone desiderata (0,1 M) e dal rapporto calcolato ([A-]/[HA]), determinare i volumi delle soluzioni 0,2 M KH2PO4 e 0,2 M Na2HPO4:
V (KH2PO4) =[HA] / [Concentrazione totale] * Volume totale
=0,1 milioni / (0,1 milioni + 0,1 milioni) * 1000 ml
=500 ml
V (Na2HPO4) =[A-] / [Concentrazione totale] * Volume totale
=0,1 milioni / (0,1 milioni + 0,1 milioni) * 1000 ml
=500ml
2. Trasferire 500 mL di soluzione 0,2 M KH2PO4 in un matraccio tarato da 1000 mL.
3. Aggiungere 500 mL di soluzione 0,2 M Na2HPO4 al matraccio tarato.
4. Agitare delicatamente la beuta per mescolare le soluzioni.
5. Controllare il pH del tampone utilizzando un pHmetro. Regolare il pH a 7,5 aggiungendo piccoli volumi di soluzioni 0,2 M KH2PO4 o 0,2 M Na2HPO4 secondo necessità.
6. Se necessario, aggiungere acqua deionizzata per portare il volume finale del tampone fino a 1000 mL.
7. Miscelare accuratamente il tampone utilizzando un agitatore magnetico o un'ancoretta.
Il tampone fosfato 0,1 M di pH 7,5 è ora pronto per l'uso. Conservare il buffer alla temperatura appropriata per le condizioni sperimentali.
