Acido desossiribonucleico e proteine. Il DNA è organizzato in unità chiamate geni, ognuno dei quali codifica per una particolare sequenza di RNA o proteina. I geni sono studiati per conoscere la struttura e la funzione biologica, l'evoluzione, la malattia e molti altri aspetti dei sistemi viventi. Per studiare i geni in dettaglio, il DNA deve essere isolato e purificato da cellule di interesse.

DNA Extraction

Anche se il DNA di una singola cellula può essere estratto e studiata, non è sufficiente per vedere con la occhio nudo Per ottenere una quantità sufficiente per lo spooling, i più celle si deve lavorare con i migliori (molti milioni).

protocolli esatte variano considerevolmente per tenere conto delle caratteristiche uniche di campioni specifici, ma i passi generali sono omogeneizzazione, lisi, digestione, separazione e raccolta. La procedura può essere eseguita in un piccolo (a seconda della dimensione del campione) di vetro o tubo di plastica.

Un campione viene generalmente miscelato o triturato per separare completamente le cellule l'una dall'altra. Ciò rende gli ingredienti cellulari più accessibili ai reagenti che seguono. Detergenti o enzimi vengono quindi aggiunti all'omogenato per lisare le membrane cellulari (e le membrane nucleari se le cellule sono eucariotiche) per liberare il DNA. A questo punto, il DNA è circondato da proteine, lipidi, carboidrati --- tutto il resto che era contenuto nelle cellule.

Un ulteriore digestione enzimatica può essere necessario per abbattere le proteine ​​in modo che non si legano al DNA e interferire con la sua collezione. Il DNA viene separato dal resto del contenuto cellulare aggiungendo alcool freddo, puro, etilico o isopropilico. Il DNA non è solubile in questi alcoli, quindi si condenserà per cercare di minimizzare il suo contatto con l'alcol. Il condensato DNA s poi raccolto, solitamente da centrifugazione --- o roccatura.

DNA spool

collezione DNA roccatura è efficace quando una grande quantità di DNA è ottenuto da un procedimento di estrazione. È anche un eccellente metodo di dimostrazione dal momento che è chiaramente visibile un impressionante intreccio di DNA puro.

Per avvolgere il DNA, il passaggio di separazione deve essere eseguito con attenzione. Se non era una parte della miscela di reagenti di lisi precedentemente aggiunta, una soluzione concentrata di sale (cloruro di sodio) deve essere aggiunta alla soluzione prima della fase di aggiunta di alcool. L'alcool freddo viene versato lentamente lungo il lato della provetta per formare uno strato sopra la soluzione acquosa, evitando la miscelazione. Se fatto correttamente, l'alcol formerà il proprio strato sopra lo strato salato. Poi arriva lo spooling.

Per raccogliere il DNA dallo strato salato, posiziona con cura un bastoncino di vetro con lo strato di alcol fino a toccare il fondo del tubo. Ruota lentamente l'asta tra le dita, mentre osservi l'interfaccia tra i due strati. Se è presente abbastanza DNA, si raggrupperà nell'interfaccia tra gli strati per formare una massa traslucida lattiginosa. Fai girare l'asta per avvolgere il DNA attorno ad esso (che è la parte di avvolgimento) ed estrailo dal tubo. Il DNA può essere trasferito in un'altra provetta di alcool puro per la conservazione o ulteriori analisi.