Gli scienziati e i tecnici spesso hanno bisogno di calcolare la concentrazione di cellule in una sospensione. Ad esempio, quando un paziente ottiene il prelievo di sangue presso uno studio medico, il laboratorio può utilizzare determinati metodi per cercare la quantità di globuli bianchi in un dato volume di sangue. Ciò fornisce al medico molte informazioni sulla salute del suo paziente, in particolare il suo sistema immunitario e se sta combattendo un'infezione o un'altra malattia. Test come questo possono cercare molte altre cellule nel sangue così come il liquido spinale e altri fluidi corporei, come il numero di spermatozoi nello sperma per scopi di fertilità. Gli scienziati calcolano anche le concentrazioni cellulari di batteri, lieviti e altri microrganismi per numerosi scopi che vanno dalla ricerca ecologica alle tecnologie industriali. Una delle tecniche più comuni è anche insegnata in molte classi di biologia del college e utilizza un dispositivo chiamato camera di conteggio.
Diluire il campione
Prima che la sospensione cellulare possa entrare nella camera di conteggio potrebbe richiedere una diluizione perché potrebbe contenere migliaia o milioni di celle. In tal caso, le celle non possono essere conteggiate ragionevolmente. Per diluire il campione, utilizzare una pipetta sterile per posizionare dieci microlitri della soluzione cellulare in una provetta contenente 90 microlitri di un diluente. Il tipo di diluente dipenderà dal tipo di cellula. Mescolalo bene. Questa soluzione è ora dieci volte più diluita rispetto al campione iniziale, quindi il suo fattore di diluizione è 10 -1. Etichettalo Ripetere l'operazione più volte, usando una pipetta sterile ogni volta, fino a quando la soluzione è sufficientemente diluita. Se la diluite una seconda volta, la seconda provetta è stata 100 volte più diluita della soluzione iniziale, quindi il fattore di diluizione era 10 -2 e così via. Contando le cellule Potrebbe essere necessario provare diverse diluizioni per determinare il giusto fattore di diluizione per la camera di conteggio. Una camera di conteggio è fondamentalmente una scatola molto piccola, chiara, rettangolare con una profondità precisa e una griglia precisa inscritta sulla parte superiore. È anche noto come emocitometro o talvolta ematometro. L'obiettivo è che la sospensione sia sufficientemente diluita che quando viene visualizzata nella camera di conteggio, nessuna cella si sovrappone e viene distribuita in tutta la griglia in modo uniforme. Pipettare la sospensione diluita contenente le cellule nel pozzetto nella camera di conteggio, dove si depositerà nella camera della griglia attraverso l'azione capillare. Posiziona la camera di conteggio sul tavolino del microscopio e osservala a bassa potenza. La griglia contiene quadrati composti da quadrati ancora più piccoli. Seleziona circa quattro o cinque quadrati, o comunque molti di cui hai bisogno di contare almeno 100 celle, secondo uno schema a tua scelta, come i quattro angoli e un quadrato centrale. Se le celle sono grandi, potrebbero essere i quadrati grandi, ma se le celle sono piccole, potresti invece scegliere i quadrati più piccoli. Calcolo della concentrazione Il volume specifico di ogni quadrato di griglia potrebbe variano a seconda del produttore della camera di conteggio, ma spesso la profondità della camera è di 0,1 millimetri, l'area dei quadrati grandi è di 1 millimetro quadrato e l'area dei quadrati più piccoli è di 0,04 millimetri quadrati. I quadrati più grandi, quindi, hanno un volume di 0,1 millimetri cubi. Per questo esempio, supponiamo di aver contato un totale di 103 cellule in cinque quadrati e di aver diluito il campione iniziale fino a quando il fattore di diluizione era 10 -2. Se ogni quadrato della griglia ha un volume di 0,1 sono stati contati millimetri cubici e cinque, quindi il volume totale della camera che è stata contata era di 0,5 millimetri cubici e c'erano 103 celle. Raddoppiato per renderlo di 1 millimetro cubo lo renderebbe 206 celle. Un centimetro cubo equivale a 1 millilitro, che è una misura utile per i liquidi. Ci sono 1.000 millimetri cubici in un centimetro cubo. Pertanto, se ci fosse stato un centimetro cubo o un millilitro di sospensione, avresti contato 206.000 (206 x 1.000) celle. Ecco come appare come un'equazione: Volume della griglia quadrata × numero di quadrati contati = volume totale della sospensione contata Numero di celle ÷ volume della sospensione contata = numero di celle per millimetri cubetti Conteggio delle cellule per millimetro cubo × 1000 = conteggio delle cellule per millilitro Calcolo della concentrazione non diluita Sarà necessario tenere conto di ogni diluizione eseguita per rendere la soluzione iniziale numerabile il microscopio. In questo esempio, il fattore di diluizione è 10 -2. Per calcolare la concentrazione iniziale della soluzione: Conteggio delle cellule per millilitro ÷ fattore di diluizione = concentrazione della cella Per questo esempio, il conteggio delle cellule per millilitro è 206.000 e dividendolo per 10 -2 (0,01) fornisce una concentrazione di cellule di 20.600.000 di cellule per millilitro nel campione iniziale.
