* Gli aminoacidi hanno gruppi ionizzabili: Ogni aminoacido ha almeno due gruppi ionizzabili:un gruppo carbossilico (-cooh) e un gruppo amminico (-nh2). Questi gruppi possono guadagnare o perdere protoni (H+) a seconda del pH della soluzione.
* Punto isoelettrico (PI): Ogni aminoacido ha un valore di pH specifico chiamato punto isoelettrico (PI) in cui la sua carica netta è zero. A questo pH, l'amminoacido esiste come zwitterion (sia positive che cariche negative bilanciate).
* Migrazione in un campo elettrico: Se sottoposti a un campo elettrico durante l'elettroforesi, gli aminoacidi con una carica positiva netta migreranno verso l'elettrodo negativo (catodo), mentre quelli con una carica negativa netta migreranno verso l'elettrodo positivo (anodo).
* Effetto pH sulla carica:
* pH sotto PI: L'amminoacido sarà protonato, trasportando una carica positiva netta.
* ph sopra pi: L'amminoacido verrà deprotonato, trasportando una carica negativa netta.
* ph at pi: L'amminoacido non avrà una carica netta e non migrerà.
Pertanto, il pH della soluzione tampone utilizzata nell'elettroforesi influenza direttamente la separazione degli aminoacidi:
* Separazione ottimale: L'uso di un pH leggermente diverso dal PI degli aminoacidi garantisce che abbiano una carica netta e migreranno a tassi diversi, portando a una separazione efficace.
* Scarsa separazione: Se il pH è troppo vicino al PI di un aminoacido, avrà una carica netta molto bassa e migrerà lentamente, con conseguente scarsa risoluzione.
* Nessuna separazione: Se il pH è esattamente al PI di un aminoacido, non avrà una carica netta e non migrerà affatto.
In conclusione, il pH è un fattore critico nell'elettroforesi perché determina lo stato di carica degli aminoacidi, influenzando la loro migrazione nel campo elettrico e infine dettare l'efficienza di separazione.
