Ecco una ripartizione del processo:
1. Isolamento del gene:
* Il gene desiderato viene identificato e isolato dal DNA dell'organismo del donatore usando enzimi di restrizione. Questi enzimi tagliano il DNA a sequenze specifiche, rilasciando il gene di interesse.
2. Costruzione vettoriale:
* Un vettore (spesso un plasmide o un virus) viene scelto per portare il gene nell'organismo ricevente.
* Il gene isolato viene inserito nel vettore usando enzimi ligasi, che sigillano insieme i fili del DNA.
3. Trasformazione:
* Il vettore contenente il gene viene introdotto nell'organismo ricevente (la cellula ospite). Questo può essere fatto attraverso vari metodi, tra cui:
* Elettroporazione: Applicazione di un impulso elettrico per creare pori temporanei nella membrana cellulare, consentendo al vettore di entrare.
* Transfezione: Usando sostanze chimiche o virus per consegnare il vettore nella cellula.
* Microiniezione: Iniettando fisicamente il vettore direttamente nella cella.
4. Selezione e screening:
* Vengono selezionate solo le cellule che hanno preso con successo il gene. Ciò può essere ottenuto utilizzando marcatori di resistenza agli antibiotici o altri meccanismi di selezione.
* Le cellule trasformate vengono quindi sottoposte a screening per confermare che il gene è stato correttamente incorporato nel genoma ospite ed è funzionale.
5. Espressione genica:
* Una volta che il gene è integrato nel genoma della cellula ospite, può essere espresso, portando alla produzione della proteina desiderata.
Applicazioni di clonazione genica:
* Produzione di proteine terapeutiche: Clonazione di geni per insulina, ormone della crescita e altre importanti proteine.
* Terapia genica: Sostituzione di geni difettosi con quelli funzionali in pazienti con disturbi genetici.
* Biotecnologia agricola: Presentazione di geni per la resistenza ai parassiti, tolleranza agli erbicidi e miglioramento del contenuto nutrizionale nelle colture.
* Ricerca e sviluppo: Studiare la funzione e la regolazione genica.
La clonazione genica è un potente strumento con applicazioni diffuse in medicina, agricoltura e ricerca.
